Notch1(NICD)过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs增殖分化的影响.PDF

天津医药2014年9月第42卷第9期 883 Notch1(NICD)过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs 增殖分化的影响 1 1 2△ 3 3 杜红阳 李东宁 付海燕 包翠芬 秦书俭 【摘要】 目的 探讨过表达Notch1(NICD)基因对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖分化的影响。方法 构 建Notch1(NICD)过表达真核载体，实验分正常对照组（CON组，不做转染）、阳性对照组（空载体组，将质粒pEGFP-N1 转染BMSCs）和转染组（将重组质粒pEGFP-N1-NICD转染BMSCs）。转染48h后观察细胞一般状态，Real-time PCR和Westernblotting检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和Notch1基因和蛋白表达， 流式检测转染后细胞凋亡、细胞周期，MTT检测细胞增殖情况。结果 重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计 完全一致。转染组和空载体组BMSCs均可表达绿色荧光。转染组GFAP、Notch1的基因和蛋白表达均高于CON组 和空载体组（均P＜0.05），空载体组与CON组差异无统计学意义；各组间NSE 的基因和蛋白表达差异无统计学意 义。转染组存活细胞比率低于CON组和空载体组，早期细胞凋亡比率、晚期细胞凋亡比率均高于CON组和空载体 组；空载体组晚期细胞凋亡比率高于CON组。转染组细胞处于G1/G0期的比例高于CON组和空载体组，处于S期 和G2/M期的比例低于CON组和空载体组（均P＜0.05）。除转染1d时各组MTTA 值差异无统计学意义外，其余 490 时点转染组MTTA 值均低于CON组和空载体组（均P＜0.05）。结论 高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度 490 上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖，且表现诱导向神经胶质样细胞分化。 【关键词】 细胞增殖；细胞分化；转染；神经胶质原纤维酸性蛋白质；磷酸丙酮酸水合酶；Notch信号通路；骨髓 间充质干细胞；诱导；Notch1(NICD) 【中图分类号】 R349.5 【文献标志码】 A 【DOI】 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.009 ConstructionofNotch1(NICD)EukaryoticExpressionVectorandItsInfluenceonthe ProliferationandDifferentiationofRatBoneMarrowMesenchymalStemCellsinvitro 1 1 2△ 3 3 DUHongyang,LIDongning ，FUHaiyan ,BAOCuifen,QINShujian 1DepartmentofDermatology,2ICUintheFirstAffiliatedHospitalofLiaoningMedicalUniversity,3DepartmentofAnatomy, LiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001,China △CorrespondingAuthor E-mail：4197123@163.c