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乌司他汀通过减少失血性休克血管通透性改变提供保护作用 林波 刘友坦 李涛 曾凯 蔡书民 曾振华 林财珠 陈忠清 高友光 摘要： 目的：最近的研究证明失血性休克（HS）后自身细胞凋亡级联反应是由于内皮 细胞功能障碍，血管通透性增高引起的。我们前期研究证实乌司他汀（UTI）可 减少氧化应激介导的内皮细胞通透性增高和凋亡信号的激活。本研究中，我们 猜测UTI 通过调节自身凋亡信号级联反应改善HS 介导的失血性休克引起的血管 通透性增高。方法：在大鼠身上制造失血性休克模型，通过抽血使大鼠平均动 脉压到40-45mmHg ，持续60 分钟，然后将血输回。体内荧光显微镜检测大鼠 肠系膜小静脉通透性的改变。在活体大鼠身上，用失血性休克大鼠血浆灌注鼠 肺微血管内皮细胞（RLMVECs）120 分钟，然后评估跨内皮电阻（TER ）。在活 体上检测线粒体细胞色素C 的释放和细胞凋亡蛋白酶-3 的激活的改变。活体上 细胞凋亡的比率通过Annexin-V/PI 染色法评估；通过JC-1 法测线粒体膜电位； 通过试剂盒测细胞内ATP 含量；通过DCFH-DA 测量活性氧；通过免疫荧光染色 测量黏附连接蛋白 β-连接蛋白含量。结果：在活体上，UTI 相对失血性休克组 减弱了失血性休克介导的血管通透性增高 （p ＜0.05 ）；在活体上，UTI 减弱了 休克血浆引起的鼠肺微血管内皮单层细胞通透性的增高（p ＜0.05 ）。在活体上， UTI 抑制了细胞色素c 的释放和细胞凋亡蛋白酶-3 的激活（p ＜0.05 ）。在活体 上，休克血浆可以介导细胞凋亡，引起ATP 水平降低，线粒体细胞膜去极化， 活性氧增高，以上均可通过UTI 预处理得到改善（p ＜0.05 ）。UTI 可以改善休 克后血浆所导致的内皮细胞连接处的的破环。结论：UTI 可以抑制失血性休克 后血管通透性的增高。UTI 会在失血性休克中调节氧化应激和自身凋亡信号的 改变。 简介 血管通透性增高常见于几种情况，如失血性休克（HS），是由于内皮细胞屏 障的破坏[1,2]。最近研究显示，自身凋亡信号通路级联反应会涉及到内皮细胞 功能失调，从而在失血性休克后引起血管通透性增高[3-5]。 自身凋亡通路是通过释放细胞色素c 释放介导的，第二线粒体源性细胞凋亡 激活剂（smac ），和细胞凋亡介导的各种因素（AIF ）[6,7]。Smac 的易位和细 胞色素c 由线粒体到细胞质的释放是细胞凋亡蛋白酶激活的重要途径[8]。细胞 凋亡蛋白-3 被证实可以断裂 β-连接蛋白，从而破坏血管内皮-黏附- β-连接蛋白 复合体，此复合体为内皮细胞连接的重要结构[9]. 乌司他汀（UTI），主要用于败血症，休克，胰腺炎和缺血再灌注损伤的治疗， 已证实通过线粒体保护作用发挥抗凋亡作用[10-14]。并且，我们前期研究证实 活体中UTI 抑制氧化介导的内皮细胞通透性增高和凋亡通路的激活[4]。在本实 验中，我们猜测UTI 可以通过调节自身凋亡级联反应改善失血性休克介导血管 通透性增高。 材料与方法 实验动物 实验中所用动物严格按照国家卫生和健康机构指南使用。实验经福建医科大 学委员会通过。重180-200g 的S-D 大鼠由福建医科大学提供，实验前一周适应 新的环境。大鼠自由进食。 外科操作和活体镜检 肌注戊巴比妥钠（30mg/kg ）麻醉大鼠。运用PE-50 套管针穿刺股动脉连续 监测平均动脉压（MAP）。第二跟套管针穿刺股静脉用于给药及输血。第三根 套管针穿刺另一侧动脉用于抽血。大鼠仰卧位固定于温度可控树脂玻璃板上， 并将玻璃板上升至活体显微镜处。肠系膜温度控制在37 度。肠系膜以 2ml/min 浇注生理盐水并以塑料膜包裹以防止体液蒸发。直径20-35μm 的小静 脉用于实验观察。 血管通透性测量 在全部实验开始前大鼠可以恢复意识30 分钟。在此期间，大鼠以 50mg/kg 剂量给予FITC-albumin，获得血管内外基线-整合的光强。大鼠分为对 照（假手术）组，失血性休克组和UTI 组（50000u/UTI 预处理）。每组六只大 鼠。实验组大鼠经历60 分钟的失血性休克。含肝素的注射器通过颈动脉抽血使 MAP 降低至40mmHg 。休克期过后，抽出的血和两倍的生理盐水重新注入使 MAP≥90mmHg 。休克过后间隔10 分钟一次测量参数至60 分钟。 FITC—albumin 的渗出通过整合过光强的改变来分析：ΔI = 1-(Ii-Io)/Ii，ΔI 是光 强的变化，Ii 为血管内的光强，Io 为血管外的光强。标记蛋白（FIT