GB/T 18636-2002蓝舌病诊断技术.pdf

(;B/,r18636 2002 前 卜J 本标准根据我国近二十年对蓝舌病诊断的研究成果和技术的发展，参考世界动物P.}几组织厂w。山! OrganizationforAnimallieaIth(#}),OfficeIntentionaldesEpizootic(法).)(工G」标准性文件世《界动物 I1.生组织推荐的诊断力一法和生物制品标准手册))2.1.9条 “蓝占病”和澳大利亚动物疫病标雕诊断方法 Bluetongue 帝而编写的 本〔标准引用了GI3/T18089-200A(微量中和试验及病毒分离和鉴定方法》 有关规定力法 俄舌病是由库蝶传播、蓝舌病病毒引起的仗害反当动物的严重传染病。蓝舌病病毒系呼肠孤病毒科 环状病毒属t3群成员、国际已知有24个血清型，在血清学 卜与环状病毒属相关病毒有交叉反应:该病 毒主要引起绵羊发病和死亡 牛及其他反=1动物常为隐性感染，但川通过媒介昆虫传播本病 鉴于该病 的诊断和检疫技术复杂，因此应建立该病的综合诊断技术标准.这是制定本标准的宗旨 本标准规定的方法，分别适用于病At分离鉴定、病原检测、病毒血清j}1鉴定和抗体检测等不同需要。 木标准的附录A、附录日都是标准的附录，附录C是提示的附录。 本标准山中华人民共和国农业部提出。 本标滩山个国动物检疫标准化技术委员会归CI, 本标准起草单位:云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室、农业部动物检疫所、大津动植物检疫 )1.) 本标准主要起草人:张念祖、杨承谕、李志华、张富强、胡玉玲、张开礼、马洪超、赵祥平、向文彬 中华人 民共和 国国家标 准 蓝 舌 病 诊 断 技 术 GB/,r18636-2002 Diagnostictechniquesforbluetongue 1 范围 本标准规定J蓝舌病的诊断技术和程序。 本标雕适用于蓝舌病的诊断和检疫。4,5,6章用于病毒分离鉴定和病原检测,7,8章用于病毒的血 清型鉴定，9,10章用于抗体检测。 2 引用标准 下列标准所包括的条文.通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订.使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 (B/f18089 2000 蓝舌病微W血清中和试验及病毒分离和鉴定方法 3 病毒分离和鉴定 3.1 器械和设备 3.1.1 %孔组织培养板(平底，简称96孔板)，单道微量加样器(0.511一101L,51,1,-10,11· 4011一，0p1.200tal一100011)及滴头，八道连续加样器(50fl,,100V1_,150uL,20011)及滴头 3门.2 1(、2oC、一80(冰箱，普通恒温培养箱及二氧化碳培养箱。 3门.3 鸡胚开孔器，照蛋箱或鸡胚用灯，组织捣碎器及擦镜纸(高压灭菌备用)。 3.1.4 超声波粉碎器，低速离心机，倒置显微镜及荧光显微镜 I2 试剂 J卜材料 12门 肝素抗凝血采血竹 3.2.2 细胞:蚊子细胞(C6/36)、仓鼠肾细胞(BHK,)或非洲绿猴肾细胞(Vero) 3.2.3 细胞培养液及分散液(按常规配力配制) 3.2.4 ir,病p-s隆抗体1(8n3B6,7D3n2)o 12.5 蓝r-病荧光抗体 12.6 1()一11l1龄鸡胚。 13 病毒分离 I11 样品的采集和制备见(:B/118089-2000中8.1。 I12 鸡胚接种见(.B门’18089-2000中8.2 I13 接种细胞 33.3.1将捣碎的鸡胚肝组织离心，2000r/min,10min，取r.清液 为避免不必要的“有传”先‘对待分 离材料进行捕获酶联免疫吸附(ELISA)试验(见第 ‘章)，将呈阳性的反应材料接种 (;6/36细胞，睡份 样.结接两管(瓶)，梅管(瓶)接 。.2ml。将接种细胞置于30C温箱培养7d 13.3.2 吹打接种的(6/36细胞，接种于BHK 细胞，侮份C6/36接种八管(瓶)BHK ，旬管0.2ml， 接种的BIIK细胞ti:于37(环境中，吸附th一hRAI生)竺兰全1夔鲤选竺2缨燮些堕生 出现细 中华人民共和国国家质里监督检验检疫总局2002-02-19批准 2002-0501实施