基于FXR的蒲公英乙酸乙酯提取物利胆作用研究-中西医结合基础专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 摘 摘 要 背景： 胆汁淤积(CholestasiS)，又称为胆汁淤积综合征，指在肝细胞或胆管水平胆汁 生成、分泌或流动障碍，导致胆汁不能正常进入十二指肠的一组疾病共同的临床症状， 而引起黄疽、皮肤瘙痒等症状的综合征n吨1。胆汁淤积主要包括肝外胆汁淤积和肝内胆 汁淤积两大类，是许多肝胆疾病共有的基础病变，其病因包括病毒感染、原发性胆汁 性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、药物性肝损、妊娠期肝内胆汁淤积等多种因素，因 此胆汁淤积症是内科临床上的常见综合症，发病率极高(如妊娠期肝内胆汁淤积发病 率高达13％)，严重威胁人类健康。 蒲公英(TaFaxacum mongoJicum Hand．一Mazz．)具有清热解毒，消肿散结，利尿 通淋功效，临床上对慢性胆囊痉挛及结石症有效。经本实验前期研究发现，蒲公英能 促进正常大鼠胆汁分泌，保护肝细胞的药理活性，有望开发成为一种临床上治疗胆汁 淤积的新药。但其作用机制未见相关报道，有待进一步研究。因此，利用现代化分析 手段和分子生物学技术对利胆的中草药如蒲公英作用于机体的信号通路进行探索，进 一步研究蒲公英保肝利胆的分子机制，不仅为开发安全有效的抗胆汁淤积药物提供新 的研究思路，还可指导临床科学用药，具有重要的研究意义和经济价值。 研究目的： 研究蒲公英乙酸乙酯提取物(The Ethyl Acetate Extract Of Taraxacum，TEE) 与咖啡酸(Caffeic acid)通过法尼醇受体(Farnesoid X receptor，FXR)及其靶 基因胆固醇7a羟化酶(Cholesterol 7a—hydroxylase，CYP7A1)和胆盐输出泵(Bi le salt export pump，Bsep)对a一萘异硫氰酸酯(a—naphthylisothiocyanate，ANIT) 诱导的急性肝内胆汁淤积模型大鼠护肝利胆的作用及机制。 方法： 1．观察胆汁淤积模型大鼠灌服蒲公英正丁醇、乙酸乙酯、石油醚提取物后，对胆 汁排泄、肝功能等生化指标表达的影响。 模型组灌胃给予Q一萘异硫氰酸酯ANIT(100 mg／kg)造成急性肝内胆汁郁积模型。 蒲公英正丁醇提取物组灌胃给予蒲公英正丁醇提取物及灌服ANIT(100 mg／kg)造模。 蒲公英乙酸乙酯提取物组灌胃给予蒲公英乙酸乙酯提取物及灌服ANIT(100 mg／kg) 造模。蒲公英石油醚提取物组灌胃给予蒲公英石油醚提取物及灌服ANIT(100 mg／kg) 造模。阳性对照组灌胃给予熊去氧胆酸(50mg／Kg)及灌服ANIT(100 mg／kg)造模。 模型对照组灌胃给予0．5％CMC-Na溶液和植物油(用于溶解ANIT的溶剂)作为模型 对照。各组大鼠末次药后2h，腹腔注射20％乌拉坦(1．0 g／kg)麻醉大鼠，进行胆管 插管手术，收集胆汁、全身血液和肝脏。测定胆汁流，称量肝重，检测肝功能相关生 化指标(丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、 血浆中总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA))的含量。 血浆中总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA))的含量。 2．蒲公英乙酸乙酯提取物(TEE)的急性毒性考察。 将100只昆明(KM)小鼠按体质量随机分为10组，每组10只，雌雄各半。按最 大剂量开始给药，之后以0．75倍递减，给药4 h后正常饲养，观察7 d。 3．蒲公英乙酸乙酯提取物(TEE)指征成分咖啡酸在正常大鼠和ANIT诱导的急性 肝内胆汁淤积模型大鼠中的药动学比较 建立简便、快速、灵敏的生物样品中咖啡酸的HPLC检测方法，并且对专属性、 灵敏度、线性范围、回收率、精密度、基质效应和稳定性等方法学进行确认。正常大 鼠和ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积模型大鼠灌服TEE，测定各时间点的血药浓度，计 算药动学参数，比较TEE在正常大鼠和ANIT诱导后48h的急性肝内胆汁淤积模型大 鼠血浆内血药浓度的差异。 4．观察胆汁淤积模型大鼠分别灌服TEE及咖啡酸高中低三个剂量后，对胆汁排泄、 肝功能等生化指标、胆汁池、病理切片分析、肝脏中FXR、CYP7A1和Bsep的基因表 达及其蛋白表达的差异性。 模型组灌胃给予(100 mg／kg)造成急性肝内胆汁郁积模型。TEE(高中低)组灌 胃给予相应剂量的TEE及灌服ANIT(100 mg／kg)造模。咖啡酸组灌胃给予相应剂量 的咖啡酸及灌服ANIT(100 mg／kg)造模。阳性对照组灌胃给予熊去氧胆酸(50mg／Kg) 及灌服ANIT(100 mg／kg)造模。模型对照组灌胃给予0．3％CMC-Na溶液和植物油作 为模型对照。各组大鼠末次药后2h，腹腔注射20％乌拉坦(1．0 g／kg)麻醉大鼠，进 行胆