研究生细胞技术绪论.pptVIP

细胞培养技术;;细胞培养技术理论课内容;第一章 绪论;上世纪初（1907年）美国科学家Harrison和Carrel创建的、以淋巴液为培养基在试管内成功地培养了蛙胚神经组织。50年代在培养容器、培养液及技术操作上都进行了大的改进，使细胞培养进入一个突飞猛进的发展阶段。70年代，随着遗传缺陷细胞株的培育，杂交瘤技术制备单克隆抗体，癌基因转染及基因工程出现，使细胞培养技术不仅用于研究生命科学，也成为生物工程、基因工程和组织工程等学科的生产手段。 ;细胞（组织） 培养 ; 根据实验目的、观察指标决定组织 （器官）或是单个细胞。细胞培养是用剪碎的小组织块或分离的单个细胞进行培养，这种培养将会失去原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增殖，可以特性化，可以获得遗传背景相同的群体，可以保存。培养选材一般来自胚胎组织的培养物；比成体组织更易生存和???长。这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组织干细胞（ESC），它们具有更高的自我更新和多能分化的能力。 ;原代培养 一般指细胞从组织中分离在体外生长至传代之前的细胞培养。这种培养通常是异质性，生长缓慢，但比较能代表原组织的类型并表达原组织特性。缺点是在培养过程中会失去许多原组织的细胞。 ;传代细胞 原代细胞生长物或细胞系生长到一定阶段，分散成单个细胞，按一定比例接种于新的培养容器内称之传代。传代细胞称之细胞系，可分为两类：有限细胞系和连续细胞系。传代形成的具有各自生物特性或标志的细胞系称之为细胞株（Cell strain）。 ;二、细胞培养基本概念;细胞纯化;细胞培养重要名词; 1）软化水：是指硬度降低至一定程度的水。在软化过程中，仅硬度降低而 总含盐量不变。 2）脱盐水（蒸馏水）：这种水由于去除了强电解质，水质纯，剩余含盐量 在1～5mg/L。25℃时用电导仪测水的电阻率为0.1～1.0×106Ω·cm。 3）纯水（去离子水）：制备过程是将普通自来水经沙过滤后，再经阳、阴 离子交换树脂和阳＋阴混合树脂交换处理。剩余含盐量在0.1mg/L左右 。 电阻率为1.0～1.0×106Ω·cm。 蒸馏水和去离子水均适用于一般培养液的配制。 4）高纯水（超纯水）：将纯水再次纯化处理，剩余含盐量在0.1mg/L以下。25℃时，水的电阻率在1.0～1.0×106Ω cm以上。用于配置组织细胞培养液，并需现配现用。 ;饱和密度(Saturation density)：在特殊培养条件下，每平方厘米(单层培养)或每毫升细胞悬液内可达到的最大细胞数。 汇合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。 超汇合(Super confluent)：单层细胞培养附在底物上生长，汇合后发展成多层状态。 ;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;细胞培养重要名词;? ;细胞培养技术已经成为商品化生物技术产品的核心。如目前可提供的产品，病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗体型免疫调节剂：干扰素、白介素和集落刺激因子等；多肽生长因子：表皮生长因子和神经生长因子等；酶类：组织型纤溶酶原激活剂；激素：EPO和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状病毒；肿瘤特异抗原；癌胚抗原；通过杂交瘤生产的各种单克隆抗体；细胞本身（如干细胞）；皮肤重植等。 ;;;;;;;;;;; 对于生物技术所使用的各种细胞株的价值，现尚难作出评价。1998年，美国市场就达3.5-4亿美元，而且每年还以6-8%的速度增长。美国细胞株供应公司和机构及国内供应单位可在网上查询 。;三、对细胞培养的评价;三、对细胞培养的评价;微生物是一类肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍或几万倍后才能观察到的微小生物。 根据微生物的细胞结构、分化程度和化学组成，可分为3大类： 非细胞型微生物:病毒、朊病毒（朊粒） 原核细胞型微生物：细菌、支原体、立克次体、衣原体、立克次体和放线菌。 真核细胞型微生物：真菌; 培养细胞的污染概念包括所有混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质及细胞。 ;真菌污染 细菌污染 支原体污染：可做如下检测 相差显微镜检测 荧光染色法 电镜检查 DNA分子杂交或支原体培养方法 ;把好每一个关口，尽可能禁止任何有污染的物品进入培养操作环节；;;无支原体污染的Hela细胞;Hoechest33258荧光染色检测细胞培养中支原体污染;疑似支原体污染的Vero细胞;药物清除Ve