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利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠h1-calponin的RNA干扰载体
孙启荻，苏楠，戚华兵，金旻，陈锚锚，陈林（第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军创伤中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆，400042）?
? 【基金项目】：国家重点基础研究发展规划项目（No.2005CB522604）；国家自然基金杰出青年基金（No.；国家自然基金重点项目(No；重庆市科技计划项目（No.CSTC.2004BA5016）
Supported by Special Funds for Major State Basic Research Program of China (973 program) (No.2005CB522604), the National Natural Science Foundation for Young Distinguished Scholars(No, the Key Program of the National Natural Science Foundation of China(No and Committee of Science and Technology of Chongqing (No.CSTC.2004BA5016)
【作者简介】 孙启荻（1983－），男，重庆人，硕士研究生，主要从事骨骼发育方面的研究。电话：(023【通讯作者】 陈林，电话:(023 E-mail：linchen70@163.com
摘要: 目的 利用pSOS-HUS系统构建h1-calponin RNA干扰载体并对其干扰效率进行验证。方法 利用在线软件设计三段针对h1-calponin cDNA的寡核苷酸（A, B, C），经退火成为双链后分别装入pSOS-HUS载体，得到载体calponin-PS-A/B/C。再将h1-calponin cDNA插入该载体和GFP一起融合表达，得到calponinRNAi-A/B/C 3个载体。对上述载体经酶切和测序鉴定后，转染至HEK293T细胞株，通过倒置荧光显微镜观察GFP荧光强度来判断上述载体的干扰效果。结果 经酶切和测序证明针对小鼠h1-calponin 的三个RNA干扰载体构建成功，荧光显微镜下观察显示，和空载体pSOS-HUS（未插入RNA干扰片段）相比，A组的荧光强度减弱最明显，B的基本不变，C的荧光强度稍有减弱 结论 成功构建了针对h1-calponin的RNA干扰载体calponin RNAi。
关键词：pSOS-HUS；调宁蛋白；RNAi
Construction of pSOS-HUS system based siRNA expression vectors against mouse h1-calponin mRNA
SUN Qi-di, SU Nan, QI Hua-bing, JIN Min, CHEN Mao-mao, CHEN Lin (State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Trauma Center, Institute of Surgery Research, Daping Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400042, China)
Abstract: Objective To construct pSOS-HUS system based siRNA expression vectors against mouse h1-calponin mRNA. Methods Three pairs of primers (A,B,C) with predicted specific RNAi effect on mouse h1-calponin mRNA were choosen using online designing software. Each pair of these primers and the h1-calponin cDNA were cloned into pSOS-HUS to get calponin RNAi A, calponin RNAi B, and calponin RNAi C. After being confirmed by restriction enzyme digestion and sequencing analysis,,they were transfected into HEK293Tcell
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