以双向电泳为基础的肺癌组织差异蛋白分析策略.docVIP

以双向电泳为基础的肺癌组织差异蛋白分析策略 靳胜　张曼 张秀敏　许华林　张敏　郝林　（北京世纪坛医院临检中心，北京，100038） 【摘 要】 背景与目的：肺鳞状细胞癌的癌变是一个多基因参与、多阶段的复杂过程， 但癌变机理仍不清楚，应用蛋白质组学技术研究此过程有可能识别癌变相关蛋白质，对揭示肺鳞癌癌变机制具有重要的意义。本研究的目的是优化肺鳞癌组织的蛋白质样品制备方法，并建立蛋白图谱进行差异分析，为鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础。方法：收集、筛选癌组织标本以及癌外周组织标本。裂解纯化总蛋白质，应用固相PH双向凝胶电泳分离组织的总蛋白质，凝胶考马斯亮蓝显色后，用PDQuest软件分析图谱，比较差异表达蛋白质。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱（PMF），然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果：获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，平均蛋白质匹配率达 76%，蛋白质点在位置上有较好的重复性，不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是（0.96±0.27）mm ，SDS方向偏差是（1.23±0.22）mm，并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生等有关的蛋白质。。结论：建立了肺鳞状细胞癌组织的双向电泳检测方法，为进一步构建其蛋白质表达数据库以及研究其的蛋白表达图谱，并在此基础上进行差异蛋白显示比较，为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础。 关键词：双向电泳 肺鳞状细胞癌组织 蛋白质组 The different Proteom Analysis of Human lung cancer tissues on the basis of 2-DE JIN Sheng, ZHANG Man ，ZHANG Xiu-min, XU Hua-lin, ZHANG Min, HAO Lin （Center of clinical laboratory of Beijing　Shijiatan Hospital ，Beijing 100038，China） 　　 Abstract: Background and objective: This study was designed to establish and optimize the two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) for the proteome analysis of human lung squamous Carcinomas, and establish the two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) profile of normal and carcinoma tissues. The basic aim is to　perform differential　analysis and provide a basis for identifying carcinogenesis-associated protein of human lung squamous Carcinomas .METHODS: After obtaining samples of the normal and carcinoma tissues, A series of methods, Such as sample preparation 、electrophoresis parameters、 gel concentration 、PDQuest 2DE analysis software, peptide mass fingerprint (PMF,MALDI-TOF-MS)were used to analysis these tissues. RESULTS and conclusions: The good 2DE patterns of different tissues including resolution and reproducibility are obtained. After coomassie Brilliant Blue R-250 staining , the average matching rate was 76%.There was a good reproducibility of spot position in 2DE map , with average deviation in IEF direction of 0.98±0.26mm,and1.23±0.22mm in SDSdirection .The 2-DE patterns with good quality have bee