《大黄鱼人工诱导雌核发育后代的微卫星标记分析》-毕业论文设计（学术）.docVIP

lw 大黄鱼人工诱导雌核发育后代的微卫星标记分析 微卫星分子标记（SSLP），是继RFLP技术之后的第二代分子标记技术。相比传统的形态学、细胞学标记、同工酶标记、免疫学标记以及RFLP、RAPD、AFLP等分子标记，微卫星分子标记具有诸多优点：按孟德尔方式分离、呈共显性遗传方式、高度多态性、引物通用性较强、操作简单、重复性强、不受环境、生长发育和年龄等因素的影响等。同时，Javier等（2005）用 RAPD、RFLP、SSR 分子标记方法研究了酵母不同品系发现，微卫星标记检测出来的遗传多态信息量是AFLP检测出来的多态信息量的2倍，是RAPD的3倍多，这说明采用微卫星分子标记可以获得更多的遗传信息。因此微卫星在遗传多样性分析、遗传连锁图谱的构建、种质鉴定和遗传育种、亲缘关系及QTL定位等方面得到广泛应用。 3.1 微卫星的概念及其发展史 微卫星（Microsatellite），又称简单序列重复（Simple sequence repeats, SSR）、短串联重复（Short tandem repeats），是由核心序列（core sequence）和两端侧翼序列构成，一般长二十至几百个碱基（Beckmann Weber, 1992）。核心序列为1～6bp的核苷酸序列多次串联重复的序列，而两端的侧翼序列是相对保守的单拷贝序列。由于核心序列中重复次数不同及重复程度不同而造成了每个基因座上等位基因的多态性。Skinner等（1974）在寄居蟹中发现了这种短重复序列。Tautz等（1989）报道微卫星广泛存在于真核生物中，且具有丰富的多态性。后来又发现微卫星不仅存在于真核生物而且存在于原核生物，甚至非常小的细菌（Gur-Arie et al., 2000）。 3.2 微卫星分子标记及特点 微卫星分子标记，又称简单序列长度多态性（Simple Sequence Length Polymorphisn, SSLP），是在PCR基础上发展起来的新分子标记技术。1986年Ali等首次用合成的微卫星寡核苷酸作为探针用于人的DNA指纹分析。Jeffreys等（1985）进一步研究并发展成为新的DNA分子标记系统。 应用微卫星标记首先必须分离出微卫星位点并设计PCR引物，传统的分离方法有基因组文库分离法、磁珠富集法和FIASCO 方法 (Fast Isolation by AFLP of Sequences Containing Repeats)，限制了微卫星分子标记技术的应用和发展。现在成熟的大规模测序技术进一步推进了微卫星标记的应用。在应用中可以根据两端侧翼保守序列设计一对引物，经PCR扩增，琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳后，即可显示出不同基因型个体间的多态性和特异性。关于它具有多态性的产生机理，可能是由于DNA复制和修复过程中滑动错配或染色体单体不均等交换的结果（孙乃恩，1990）。它可提供分辨率达一个碱基对差异的信息，且等位基因的条带容易识别和解释，比当前所有的分子标记包含更多的信息量和更可靠的信息质量，是一种用途广泛的分子标记。微卫星分子标记与其它标记相比，具有许多方面的优点：标记数量多、广泛存在于整个基因组、重复性好、稳定性强、呈共显性遗传方式、多态性丰富、易检测以及对DNA的质量要求不高等，被认为是物种遗传多样性评估的理想分子标记之一。微卫星标记已经在很多生物中被广泛应用，如家蚕（郭秋红等，2007）、德宏水牛（杨泽宇等，2007）、猪（范晓辉等，2007）等，在水产上也得到应用，如大马哈鱼（陈金平等，2004）、塞内加尔截鳍鳎(Senegal sole)（Javier Porta et al., 2005）、 HYPERLINK /fdis/exact_search.asp?SearchType=chineseExactKey=%B1%B1%BC%AB%BA%EC%B5%E3%F6%D9 北极红点鲑(Arctic charr)（Delphine Ditlecadet et al., 2006）等。朱晓东等（2007）利用30个微卫星分子标记对长江中下游5个鲢群体进行遗传多样性分析，发现群体间遗传分化程度中等，所检测位点中大部分位点偏离了Hardy-Weinberg平衡，说明群体内基因型频率发生了较大改变。目前，水产动物微卫星DNA的分离和构建发展很快，已获得了罗非鱼（Oreochromis spp）（O’Connell et al., 1997）、栉孔扇贝（Chlamys farreri）（李红蕾等，2003）、中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）（刘萍等，2004）、牙鲆（Paralichfhys olivaceus）（陈微等，2005）、大菱鲆(Scophthalmus maximus)（Pardo