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维普资讯
第 l9卷4期 中 国 病 毒 学 19 (4)：329．334
2004年 8月 VⅡt0LoGICA SD CA August 2004
针对不同基因靶位的锤头状核酶对HBV的抑制作用研究
李晓娟，况二胜，杨复华料
(武汉大学生命科学学院，湖北武汉，430072)
InhibitionofHepatitisBVirusExpressionandReplicationinCulturedCellsby
HammerheadRibozymesTargetedatDifferentSites
LIXiao-juan，KUANGEr-sheng，YANGFu—hua*
(CollegeofLfiesciences,WuhanUniversity,Wuhan430072,China)
Abstract：TlleprcgenomicRNA．servesasatemplateforreversetranscriptionandencodesthereverse
trnascriptaseofrHepatitisBvirus(I-IBV)replication，hashteenergeticallyflexiblesecondarynadtertiary
s~ ctures，which may reducehteaccessibility ofribozyme．To identify accessible targetsitesofr
hammerheadribozyme．htesceondarys~ cturenaalysisofhtefu11一length}玎BV pregenomicRNA Was
naalyzedusinghtenewestbioinformatictools．Screeninghteaccessiblesitesofrribozymebasedonhte
s缸ucmresshow htathteaccessiblesiteslocatedonhteencoderegionofS。C，X genesnadalmostnoton
hteregulationregionorhteencapsidationsignal(￡)．Therebythree hammerheadribozymestargeted
differentsitesweredesignednadtrnasfectedintocellstoevaluatehtecatalyticallyinactivationofHBV
geneexpression．ExperimentalresultsvalidatedhtathteencodingregionsofS，C，X geneswerehte
effcetivecleavagesitesforhammerheadribozymenadhteribozymetargetedX geneWas mostpotential
toinhibitHBVRNA accu—mulation．
Keywords：HepatitisBviurs(I-IBV)，PregenomicRNA，Secondarys~cture，Hammerheadribozyme
摘要：前基因组mRNA是HBV(HepatitisBvirus)基因表达和复制的重要中间产物，全长的前基因组mRNA分子具
有复杂易变的二级结构，是设计抑制 HBV 的核酶时所必须考虑的因素。我们使用多个最新的计算机软件对 HBV
前基因组mRNA二级结构进行模拟、分析，在全面分析核酶的可作用位点的基础上设计三个针对不同基因靶位的
锤头状核酶，并对它们在细胞中对HBV的抑制作用进行研究。结果表明在HBV前基因组mRNA上存在几个高度
复杂二级结构的区域，可能对核酶完全不敏感，而 S、C、x基因的编码区是
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