试验二组织制片技术.DOC

实验二 组织制片技术（二） 【目的要求】 1.掌握常用细胞壁显微鉴定技术 2.掌握常用细胞内含物显微鉴定方法 3.练习显微观察方法 【仪器、试剂、材料】 1.仪器 生物显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，显微描绘器，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，酒精灯，单面刀片，粉碎机，绘图板，铅笔等。 2.试剂 水合氯醛试剂，苏丹Ⅲ试液，稀甘油试剂，盐酸，硝酸，碘化铋钾试剂，氯化锌碘试液，硫酸，α-萘酚浓硫酸试液，碘试液，间苯三酚试液，钌红试液，硝酸汞试液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，α-萘酚乙醇溶液，稀盐酸，稀醋酸等。 3.药材样品 牛膝、薄荷、石斛、 4.药材粉末 大黄、肉桂、山药、黄芪、金银花、红花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心莲 【实验内容】 一、用于组织切片及粉末药材的封藏剂 1．水合氯醛试液 为常用优良的化学透明剂之一，特点是能迅速透入组织，使干燥收缩的细胞逐渐膨胀复原，并能溶解大多数细胞内含物，如淀粉粒、叶绿体、菊糖、树脂、蛋白质、挥发油等，使细胞组织清晰透明，易于观察。 用水合氯醛装片可观察各种组织特征，各种结晶，如草酸钙结晶、碳酸钙结晶和硅质块，各类细胞形状，如导管、纤维、石细胞、木栓细胞等。不加热装片可观察菊糖、橙皮苷结晶等。 天冷时，水合氯醛装片后易析出结晶，可加一滴稀甘油避免。 2．稀甘油 为物理性透明剂，能较快的透入组织，形成良好的透光条件，一般作临时封藏剂，常用于观察胡粉粒和菌丝等。 3．甘油醋酸（斯氏液） 用于观察淀粉粒或测量其大小的封藏剂。也可以用乳酸酚溶液代替。 4．乙醇 根据不同目的，选用不同浓度的乙醇装片。50％以上浓度的乙醇可以固定乳管；80～90％浓度的乙醇可以固定和观察菊糖；95％的乙醇可以观察黏液细胞；100%乙醇可用于植物叶绿体脱色；低浓度（10～30％）乙醇可以代替水软化含黏液质的材料。 5．蒸馏水 可以溶解水溶性物质，透入组织较快，但不能溶解大多数细胞内含物，透明度差，易干燥。可用于检查淀粉粒的有无或配合其他试剂检查细胞壁和细胞内含物的性质。 二、用于检查细胞壁和细胞内含物性质的试剂 1.间苯三酚试液 常与浓盐酸配用，检查木化细胞壁。加间苯三酚试液1～2滴，稍放置，再加浓盐酸1滴，木化细胞壁因木化程度不同，显淡红色、红色或紫红色。 2．氯化锌碘试液 检查纤维素细胞壁。加氯化锌碘试液或先加碘试液后，稍放置，用滤纸条吸去多余的碘液，再加66％硫酸溶液，纤维素细胞壁显蓝色或紫色。 3．苏丹Ⅲ试液 检查角质化或栓质化细胞壁，以及脂肪油、挥发油和树脂等细胞内含物。加苏丹Ⅲ试液，放置15min以上，或微加热，角质化、栓化细胞壁显桔红色至红色；脂肪油、挥发油和树脂显桔红色、红色或紫红色。 4．碘试液 检查淀粉粒和糊粉粒。加碘试液，淀粉粒显蓝色或蓝紫色；糊粉粒显棕色或黄棕色，后者加硝酸汞试液，显砖红色。 5．α－萘酚试液 常与浓硫酸配用，检查菊糖等。 6．钌红试液 检查黏液质。加钌红试液，黏液质显红色。也可用95％乙醇装片，观察黏液细胞形状后，自玻片的一边引入1滴蒸馏水，可见黏液细胞逐渐膨胀，黏液质溶解而扩散。 7．稀醋酸 草酸钙结晶加稀醋酸后不溶解。 8．稀盐酸 加稀盐酸，草酸钙结晶和碳酸钙结晶均溶解，而碳酸钙结晶溶解并产生气泡。 9．稀（20％）硫酸 加20％硫酸，草酸钙结晶和碳酸钙结晶均溶解，并可产生硫酸钙针晶，而碳酸钙结晶溶解并产生气泡。硅质块在各种稀酸中均不溶解。 三、试验观察 1.淀粉粒 取半夏粉末水装片，观察淀粉粒的类型、形状，观察脐点的形状、位置，层纹的有无。用碘试液检验。 2.石细胞 取黄柏粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述石细胞的形状、颜色，观察细胞壁及孔沟的特征。 用间苯三酚-浓盐酸制片，观察和描述石细胞壁的木化情况。 3.纤维 取肉桂粉末少许，制水合氯醛透化片，观察并描述韧皮纤维的分布状态、形状、颜色、细胞壁的特征，测量细胞的长度和直径。用间苯三酚-浓盐酸制片，观察和描述细胞壁的木化情况。 4.木栓细胞 取黄芪粉末少许，制水合氯醛透化片，观察并描述木栓细胞的存在状态、切面观和表面观的形状、颜色。用间苯三酚-浓盐酸试液制片，观察和描述木栓细胞的木化情况；用苏丹Ⅲ试液制片，观察和描述木栓细胞的木栓化情况。 5.草酸钙针晶 取山药粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述草酸钙晶体的类型、存在状态。 6.碳酸钙晶体（钟乳体） 取穿心莲粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述碳酸钙晶体的分布状态、形状、颜色。在制片边缘滴加少许盐酸，观察钟乳体的变化和产生的现象。 7.草酸钙晶体 取大黄粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述草酸钙晶体的形态、大小、颜色。加20％硫酸检查。 8.硅质块晶体 取石斛粉末或药材纵切，制水合氯