大鼠骨髓间充质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白分布的变化及意义.PDFVIP

第’$ 卷第!’ 期 第( 三( 军( 医( 大( 学( 学( 报 d2+F ’$ ，\2F !’ ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( !’ 年J 月!$ 日 [( 7S,/V( :,+( :1V( ‘-,a ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( [G+F !$( !’ ! 文章编号：!#$%% （ !’ ）!’#( ( #% 论著 大鼠骨髓间充质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白分布的变化及意义 王翠琴，张广宇，彭( 越，彭( 涛，贾延劼( ( （%$$ 郑州，郑州大学第一附属医院神经内科） ( ( ［摘要］( 目的( 探讨大鼠骨髓间充质干细胞神经分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（)*))*+,*- .*/01. 23 /*4*)5# 6,- ，)789 ）分布的变化及意义。方法( 常规体外培养大鼠:;= ，采用 #巯基乙醇诱导:;= 分化为神经细胞。实验分 ! :;= 空白对照组、二甲基亚砜（:;8 ）阴性对照组、#巯基乙醇诱导组、不同浓度雷帕霉素干预组、不同浓度雷帕霉素干 ! 预? !#巯基乙醇诱导组。采用免疫荧光法检测诱导前后)789 在细胞内的分布，激光共聚焦显微镜观察照相；@1=.1/- A+2. 法检测诱导前后神经细胞相关蛋白和)789 通路蛋白的表达。结果( 诱导前)789 主要在:;= 细胞核内点状 分布，细胞质也有少量的分布；诱导后核内荧光信号减弱，)789 向细胞质转移。雷帕霉素处理后，随着雷帕霉素浓度的提 高（ ! B ’ #)2+C D ），)789 向细胞质转移越明显。雷帕霉素浓度超过$ #)2+C D 后，细胞形态变圆，部分细胞脱壁，死亡 率显著增加（! E F $ ）。 #巯基乙醇可诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞，诱导后神经细胞7*G 蛋白、:HI# 蛋白 $! 表达显著增加。雷帕霉素（ ! B ’ #)2+C D ）干预后，随着雷帕霉素浓度（! B #)2+C D ）的提高，7*G 蛋白、:HI# 蛋白表 达逐渐增加，’ )2+C D 时7*G 蛋白、:HI# 蛋白表达下降（! E F $ ）。 @1=.1/- A+2. 检测结果提示，诱导前后总)789 表 # % 达不变；磷酸化)789 、磷酸化4J;KL、磷酸化%MNI! 诱导后较诱导前表达下降（! E F $ ），雷帕霉素干预后下调更加显 著（! E F $ ）。结论( )789 在:;= 神经分化过程中由细胞核内向细胞质转移，活性下降，表达下调，提示)789 在 :;= 神经分化过程中可能发挥了重要作用。 ( ( ［关键词］( 骨髓间充质干细胞；诱导；神经细胞；)789 ；雷帕霉素 ( ( ［中图法分类号］( ( ( ［文献标志码］( H !#$%’$() *)+ #,)-.*)./ (- 0*00*1*) $*%,/$ (- %*2*03.) +’%), $4/ +--/%/)5 $*$() (- %*$ ()/ 0*%%(6 0/#/).430*1 #$/0 ./11# )$( )/’%()# @*-0 G,W,- ，XS