第 十 一 上章 rna的生物合成（转录p266）rna biosynthesis, transcription.pptVIP

转录和复制的相同点 都以DNA为模板 都需要依赖DNA的聚合酶 聚合过程都是核苷酸之间生成磷酸二酯键 都从5’至3’方向延伸新链 都遵从碱基配对规律 大肠杆菌转录过程包括转录起始、延长、终止三步。 真核生物的转录，除延长过程相似外，起始、终止 都与原核生物有较多的不同。 RNA synthesis occurs in a “moving” transcription bubble on the DNA template 依赖Rho (ρ)因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止 ? RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工(differential RNA processing)。 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 稀有碱基 核酶研究的意义 依据是否需要蛋白质因子的参与，原核生物转录终止分为 ： Rho因子（ ρ 因子 ）： Rho因子是rho基因的产物，广泛存在于原核和真核细胞中，由6个亚基组成，分子量300KD。Rho因子结合在新生的RNA链上，由5’端向3’端的方向移动。 Rho因子有ATP酶的活性和解螺旋酶的活性 ρ因子 DNA RNA RNA聚合酶核心酶 P273 原核生物的转录终止 1. 依赖Rho的转录终止 终止信号 2. 非依赖 Rho因子的转录终止 DNA模板上靠近终止处，有些特殊的碱基序列，转录出RNA后，RNA产物形成特殊的结构来终止转录。 Stem-loop structure 2. 非依赖Rho的转录终止 ① RNA产物3’端往往形成茎环结构，该结构阻碍RNA聚合酶前移。 ③ 寡聚U有利于RNA不再依附DNA模板链而脱出。 5’ 3’ 3’ 5’ ②转录产物中有密集的G-C配对，形成茎环结构，其后有一串寡聚U。rU:dA最不稳定。 茎环结构使转录终止的机理 使RNA聚合酶变构，转录停顿； 使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。 5′pppG 5? 3? 3?5? RNA-pol Core enzyme 杂化双链形成的机会减小 寡聚的U促使RNA从模板链脱落 二、真核生物的转录起始 （一）转录起始 真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模板，其起始过程比原核生物复杂。 真核生物编码基因两侧的DNA序列，可影响自身基因的表达活性，通常是非编码序列，包括启动子、增强子、沉默子 转录起始点 顺式作用元件(cis-acting element) 1. 转录起始前的上游区段 AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 TATA盒 CAAT盒 GC盒 OCT-1 增强子 OCT-1：ATTTGCAT八聚体（octomer） 2. 转录因子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(transcriptional factors, TF)。 参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ 3. 转录起始前复合物 (pre-initiation complex, PIC) 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。 4. 模板理论(piecing theory) 一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性，有专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。 POL-Ⅱ TFⅡF ⅡA ⅡB 由RNA-Pol Ⅱ催化转录的PIC POL-Ⅱ TFⅡF ⅡH ⅡE TBP TAF TFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物 TATA ⅡA ⅡB TBP TAF TATA ⅡH ⅡE CTD- P PIC组装完成，TFⅡH使CTD磷酸化 （二）转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。 转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。 RNA-Pol RNA-Pol RNA-Pol 核小体 转录延长中的核小体移位 转录方向 5?------AAUAAA- 5? ------AAUAAA-- 核酸酶 -GUGUGUG RNA-pol AATAAA GTGTGTG 转录终止的修饰点 5? 5? 3? 3? 3?加尾 AAAAAAA······ 3? mRNA （三）转录终止 —— 和转录后修饰密切相关。 真核生物RNA的加工 Post-