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《免疫检测技术》课件
;免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。
具有高度精确、灵敏、特异的特点。
可用于免疫学的基础理论和应用研究,也可应用于生物学研究的各个领域。; 1 、免疫疾病诊断
2 、动物植物生理活动研究(激素、维生素)
3 、物种及微生物鉴定
4 、动物、植物性状的免疫标记
5 、免疫增强药物和疫苗的研究
6 、发病机理研究
7 、分子生物学研究 ;第一节 抗原抗体反应原理;一、体外抗原抗体反应的特点;网格理论——解释抗原抗体形成沉淀的机制;三、抗原抗体反应类型;第二节 常见免疫检测方法;一、免疫沉淀反应
;絮状沉淀试验;环状沉淀试验;2. 凝胶扩散沉淀;单向琼脂扩散试验; 单向免疫扩散试验示意图;双向免疫扩散试验;;3.免疫电泳技术;血清免疫电泳;免疫电泳原理图解;火箭免疫电泳;
;二、凝集反应(Agglutination);;妊娠免疫诊断试验 ;三、补体结合实验;已知抗原加入血清(检测抗体);
免疫标记技术是采用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应。
免疫标记技术既可对样品作定性、定量检测,也可进行定位分析,且大大提高了方法的灵敏度,是目前应用最广泛的免疫学检测技术。
;
; 该法是用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体
所进行的抗原抗体反应,尽管放射免疫技术需特殊
仪器设备且有一定的放射性危害,但由于其具有高
度的灵敏度(pg)和自动化检测等特点,因此在实
验研究和临床检测中仍被广泛应用。
主要用于激素、小分子药物、肿瘤标志物等
小分子化合物的定量分析。;放射免疫分析-基本原理; Ag* Ab Ag
标记抗原 特异性抗体 待测抗原;RIA法原理及标准曲线;
将荧光素(异硫氰酸荧光素或罗丹明等)标记抗体,
制成荧光抗体诊断试剂。
用荧光显微镜观察荧光的产生或荧光强度,以此判断
抗原的存在、定位和分布情况。
免疫荧光技术有直接法和间接法等。;免疫荧光技术——直接法;免疫荧光技术——间接法;免 疫 荧 光 染 色 显 示 细 胞 骨 架;本法是抗原抗体反应的特异性与酶对底物的高效催
化活性相结合的免疫检测技术。酶标记的抗原或抗
体与待检标本中的相应成分特异性结合,根据酶作
用底物后的颜色变化,采用肉眼或酶标检测仪分
析、判断结果。
常用方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法,前
者用于检测可溶性抗原或抗体,后者常用于检测组
织中或细胞表面的抗原。;是在固相载体(通常为聚苯乙烯反应板)表面进行
的抗原抗体反应。
实验中常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP),底物
为二苯基联苯胺。;ELISA试验三个必要的试剂;;五种常见的检测方法;适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及低于二价的小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心 ;;几种标记/检测技术灵敏度的比较;几种标记/检测试剂的有效期比较;0;A.?将Ab吸附在固相载体表面;
B. 加入酶标Ag和待测Ag,竞争结合Ab; 对照只加入酶标Ag;
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知Ag量。;
血清标本中的IgM包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM
加入特异性抗原试剂:它只与固相上的特异性IgM结合
抗人IgM抗体包被 加入血清标本 加入特异性抗原试剂 加入针对特异性抗原的酶标抗体
加底物显色;捕获法 ;ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。
亲和素是一种糖蛋白,生物素为小分子化合物。
亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。
1个亲和素分子可与4个生物素分子结合。
因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来,就可提高ELISA的敏感度。 ;ABS-ELISA法
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