《免疫检测技术》课件.ppt

;免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。 具有高度精确、灵敏、特异的特点。 可用于免疫学的基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究的各个领域。; 1 、免疫疾病诊断 2 、动物植物生理活动研究（激素、维生素） 3 、物种及微生物鉴定 4 、动物、植物性状的免疫标记 5 、免疫增强药物和疫苗的研究 6 、发病机理研究 7 、分子生物学研究 ;第一节 抗原抗体反应原理;一、体外抗原抗体反应的特点;网格理论——解释抗原抗体形成沉淀的机制;三、抗原抗体反应类型;第二节 常见免疫检测方法;一、免疫沉淀反应 ;絮状沉淀试验;环状沉淀试验;2. 凝胶扩散沉淀;单向琼脂扩散试验; 单向免疫扩散试验示意图;双向免疫扩散试验;;3.免疫电泳技术;血清免疫电泳;免疫电泳原理图解;火箭免疫电泳; ;二、凝集反应（Agglutination）;;妊娠免疫诊断试验 ;三、补体结合实验;已知抗原加入血清（检测抗体）; 免疫标记技术是采用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应。 免疫标记技术既可对样品作定性、定量检测，也可进行定位分析，且大大提高了方法的灵敏度，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。 ; ; 该法是用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体 所进行的抗原抗体反应，尽管放射免疫技术需特殊 仪器设备且有一定的放射性危害，但由于其具有高 度的灵敏度（pg）和自动化检测等特点，因此在实 验研究和临床检测中仍被广泛应用。 主要用于激素、小分子药物、肿瘤标志物等 小分子化合物的定量分析。;放射免疫分析－基本原理; Ag* Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原;RIA法原理及标准曲线; 将荧光素（异硫氰酸荧光素或罗丹明等）标记抗体， 制成荧光抗体诊断试剂。 用荧光显微镜观察荧光的产生或荧光强度，以此判断 抗原的存在、定位和分布情况。 免疫荧光技术有直接法和间接法等。;免疫荧光技术——直接法;免疫荧光技术——间接法;免 疫 荧 光 染 色 显 示 细 胞 骨 架;本法是抗原抗体反应的特异性与酶对底物的高效催 化活性相结合的免疫检测技术。酶标记的抗原或抗 体与待检标本中的相应成分特异性结合，根据酶作 用底物后的颜色变化，采用肉眼或酶标检测仪分 析、判断结果。 常用方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前 者用于检测可溶性抗原或抗体，后者常用于检测组 织中或细胞表面的抗原。;是在固相载体（通常为聚苯乙烯反应板）表面进行 的抗原抗体反应。 实验中常用的酶是辣根过氧化物酶（HRP），底物 为二苯基联苯胺。;ELISA试验三个必要的试剂;;五种常见的检测方法;适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心 ;;几种标记/检测技术灵敏度的比较;几种标记/检测试剂的有效期比较;0;A.?将Ab吸附在固相载体表面; B. 加入酶标Ag和待测Ag，竞争结合Ab； 对照只加入酶标Ag； C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知Ag量。; 血清标本中的IgM包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM 加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合 抗人IgM抗体包被 加入血清标本 加入特异性抗原试剂 加入针对特异性抗原的酶标抗体 加底物显色;捕获法 ;ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。 亲和素是一种糖蛋白，生物素为小分子化合物。 亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。 1个亲和素分子可与4个生物素分子结合。 因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可提高ELISA的敏感度。 ;ABS-ELISA法