急性早幼粒细胞白血病PMLRARα融合基因筛查及实时定量检测平台的建立.docVIP

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因 筛查及实时定量检测平台的建立 第一作者：康志杰，女，主治医师， E-mail： HYPERLINK mailto:cathie1997@ cathie1997@﹡通讯作者：闫金松 教授，E-mail： HYPERLINK mailto:yanjsdmu@ yanjsdmu@通讯地址：大连医科大学附属二院血液科 辽宁大连116021本研究受大连医科大学附属第二医院青年基金资助 第一作者：康志杰，女，主治医师， E-mail： HYPERLINK mailto:cathie1997@ cathie1997@ ﹡通讯作者：闫金松 教授，E-mail： HYPERLINK mailto:yanjsdmu@ yanjsdmu@ 通讯地址：大连医科大学附属二院血液科 辽宁大连116021 本研究受大连医科大学附属第二医院青年基金资助 摘 要 目的 针对90%以上的急性早幼粒细胞白血病（acute HYPERLINK app:ds:promyelocytic \t promyelocytic HYPERLINK app:ds:leukemia \t leukemia，APL）患者表达的PML/RARα融合基因，设计引物及探针，对APL患者进行基因筛查，并构建PML/RARα环形质粒作为标准品，建立APL患者PML/RARα融合基因检测及微小残留病变监测的诊断平台，为APL患者的诊治提供分子生物学依据。方法 依据GenBank中编码PML/RARα及ABL的基因序列，设计实时定量引物及Taqman探针，对APL患者进行基因筛查，并以PML/RARαL型及S型阳性的APL患者cDNA为模板，应用PCR技术扩增出453bp和550bp的基因片段，连入pMD 18-T载体；以pMD 18T- PML/RARα（L）及pMD 18T- PML/RARα（S ）作为标准品，计算拷贝数，梯度稀释后作为模板，做PML/RARα及ABL的标准曲线，运用实时荧光定量（Real-time quantitative PCR，RQ-PCR）技术对该基因转录本水平的变化情况进行监测。结果 成功构建pMD 18T- PML/RARα质粒标准品，应用RQ-PCR技术，以ABL为内参，应用Taqman探针法，对APL患者标本进行检测，技术可行，数据稳定，成功构建APL融合基因检测及微小残留病变监测的诊断平台，应用于临床病人的基因诊断，对APL的诊治提供了可靠的分子依据。结论 依托分子生物学技术，通过先期筛查，确定患者PML/RARα融合基因阳性亚型，再以自行构建的PML/RARα环形质粒为标准品，以ABL基因为内参，应用Taqman探针法，有针对性的实时监测PML/RARα融合基因的表达情况，经济、快速，敏感性好，稳定性高，可操作性强，且首次基因筛查可降低医疗成本，对临床检验具有普遍意义，值得推广。 关键词: PML/RARα；标准品；基因筛查；实时荧光定量；诊断平台：急性早幼粒细胞白血病 The development of a diagnosis platform for screening and real time quantitation of PML/RARα fusion gene in acute HYPERLINK app:ds:promyelocytic \t promyelocytic HYPERLINK app:ds:leukemia \t leukemia 1Kang Zhijie Cuisong Lii Gao Beibei Huangdan Chen Xueyu Yan Jinsong* 1Hematology department,Second Hospital Affiliated Dalian Medical University ABSTRACT Objective: To improve clinical diagnosis and treatment of acute promyelocytic leukemia (APL)，we aimed to established a diagnosis platform for detecting PML/RARα fusion gene and mornitoring minimal residual disease by constructing a circular plasmid using PML/RARαfusion gene as a standard.Method: We designed primers and Taqman probes specific to PML/RARα（L,S）and ABL,