松材线虫病检测技术和普查方法.ppt

（5）与拟松材线虫（B. mucronatus）在形态上的主要区别 拟松材线虫与松材线虫虽然在致病力上相差悬殊，但在形态以及生物学诸方面却很相似，且由于拟松材线虫分布更为广泛，因此在检验时常常可见，在鉴定过程中易混淆。 两者从形态上的鉴别主要依据雌虫尾形的不同，拟松材线虫雌虫尾部呈圆锥形，尾端指状，有明显的尾尖突，长约3.8至5.7微米。其幼虫尾部与成虫相似，尾尖突略短。对同样有尾尖突的松材线虫个体则以雌虫尾尖突长短来区分：尾尖突长约1微米(不超过2微米)的为松材线虫；尾尖突长达2微米以上的则为拟松树线虫。同样，也可利用幼虫尾部类似情况，作为鉴定的辅助手段。 拟松材线虫的形态特征 A.雌虫 B.雄虫 C.雌虫前端 D、E.雌虫的尾部 F.雄虫尾部 G.雄虫尾部腹面观，端生的交合伞 H、I.三龄幼虫的尾部 J.休眠幼虫的尾部 K.休眠幼虫的前端 拟松材线 虫雌虫尾 部圆锥形 ，末端有 明显的指 形突。 松材线虫雌虫尾部亚圆锥形 松材线虫病检测技术 对于疫区来讲，通过形态观察基本上可以确定，但是在非疫区则需要作进一步的鉴定。此外，由于取样时间不同，样木部位不同，其线虫密度也有很大区别，这就导致有时分离到的线虫数量很少，或找不到成虫，无法确定其是否为松材线虫，也需要作进一步的鉴定。 表二 松材线虫与拟松材线虫尾形及尾尖突比较表 a、永久玻片标本的制作：将2—3ml线虫水悬液置于43℃烘箱中12分钟杀死；加在同一烘箱中预热的福尔马林-甘油-蒸馏水(8：2：90)混合液固定24小时；加同样预热的苦味酸饱和液2滴后仍在同一烘箱内缓慢脱水。混合液不断地挥发，需及时添加放在同一烘箱内的混合液。为避免挥发过快，在盛线虫的玻皿上要加盖，或将玻皿置于培养皿中。这个过程一般需6至8周。 制片时选择特征显著的雌雄成虫及幼虫各1条置于载玻片的纯甘油滴中央摆好并使其沉底。将3根粗细和线虫体宽差不多的玻璃纤维呈三角形排列在甘油滴的外缘，甘油滴的量以加盖玻片后不外溢为宜。用中性树胶或硬甘油明胶冻封片两次，待第一次封片剂完全干燥后再封第二次。 b、TAF固定液保存：将热杀死后的线虫用TAF固定后置于青霉素小瓶中保存，每隔1—2年更换一次固定液，亦能达到 相对长久保存的目的。 2、利用指示剂在被检木木屑的有机溶剂提取液中的颜色反应进行快速检疫 通过国家林业局森防总站对我国江苏、安徽、浙江、广东4个疫区5种松树的试验结果表明：利用指示剂1号进行快速检疫检验，其准确率达黑松96%；马尾松为89%；赤松为100%；火炬松为92%；湿地松为59%。除湿地松（采自江苏）外，均已达到检疫检验所要求的准确程度，可操作性强，颜色反应直观，准确率高，简便快速，整个操作过程不超过15分钟，且多个样品可同时进行。 1) 取样数量 每批总件数的0.5% ~ 5.0%，但最低不得少于3件。每件在任意3个部位分别用手摇钻或电钻钻取木屑约5克，标记。钻取木屑时要注意先把树皮剥净。 用 电 钻 钻 取 木 屑 2、 样木乙醇提取液的制备 （1）配制70% ~ 80%的乙醇溶液 （2）样木乙醇提取液的制备 将钻取的木屑分别按标记装入各大试管中，倒入70% ~ 80%的乙醇溶液，乙醇在试管中的高度约为木屑高度的1.5 ~ 2倍，管口用脱脂棉紧密封塞。立即将试管置于水浴锅或保温瓶中的80℃ ~ 90℃的热水中，并使管中液体小沸10min。然后取出试管于冷水中冷却后备用。 （3） 显色 取与试样对应数量的指形管，对应标号。分别取上述冷却后各试管中的上清液约2 ~ 3 ml置入相应指形管中。然后用滴管分别滴入2滴事先选定的指示剂，摇匀，观察颜色变化，记录结果。 4、颜色比较（1） 指示剂1号对几种松树病、健木乙醇提取液的颜色比较表 松材线虫病普查方法 1 调查组织与责任 1.1 县级负责组织普查人员，确定责任区，具体实施调查，样本初步鉴定。 1.2 市级负责参加重点区域调查，复检可疑样本，抽查核实县级普查结果， 并对可疑新疫点进行复查。 松材线虫病普查方法 1.3 省级负责督察与技术指导，新疫情发生区样本检测、认定及疫情上报。 2 调查范围 各级组织普查单位所在地行政辖区内所有松林。重点是：交通沿线、风景区、厂矿、松木制品生产和 使用单位（木材加工点、木材市场、建筑工地、仓库、驻军营房、电视机及配件厂、纺织机厂、通讯站、电站、电视塔、光缆和电 松材线虫病