分子生物学课件 第六章 转录与逆转录.pptVIP

第六章 转录与逆转录;㈠转录;2.转录的特点： 转录的不对称性：在RNA的合成中，DNA的两条链 中仅有一条链可作为转录的模 板。且多基因DNA中正负链可 相间排列 转录单向性：RNA5’→3’合成 转录连续性：共线性，RNA与DNA序列一一 对应,RNA链连续合成;有特定起始、终止位点：启动子、终止子 双链DNA转录能力大于单链：RNA聚合酶与双链结合后活性高于单链 不需完全开链：只需部分解链，最后DNA 还是双链 ;※几个概念;二 转录的过程概述;3.转录延伸：RNA聚合酶释放σ因子，核心酶 沿着模板DNA移动并使新生RNA 链不断伸长的过程。 ;4.转录终止：当RNA链延伸到终止位点时， RNA停止合成，转录泡瓦解， DNA链复原，新生RNA链和RNA 聚合酶将被释放下来。 ;※???录所需的酶与复合物;※真原核RNA聚合酶总结;原核RNA聚合酶：全酶-（α2ββ’）σ 核心酶- α2ββ’ 活性中心-ββ’ ★σ因子结构：六聚体蛋白、具有NTP酶和解螺旋酶活性，促使新生RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。 σ因子作用：与启动子-35区识别 作用机理：;※RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别：;转录复合物（反式因子）： ;;;;三 启动子与转录起始;⑵转录单元： 起始位点： ;※上游序列：-n表示 下游序列：+n表示 -n…-3-2-1起始位点+1+2+3…+n;※启动子中几个重要的序列： 原核生物：-10区：TATAAT，位于上游 10bp处， RNA聚合酶 的结合位点（富含AT 碱基，利于双链打开） -35区：TTGACA，位于上游35bp处， RNA聚合酶的识别位点，决定 转录启动的强弱 △-10区与-35区之间的距离：16～19bp，小于15bp或大于20bp都会降低启动子的活性。适宜的距离可以为RNA聚合酶提供合适的空间结构，便于转录的起始。 ;真核生物： TATA区：TATAAA，位于-25～-35，核心启 动元件，使转录精确地起始， T85A97T93A85A63A83 CAAT区：CCAAT，位于-70～-80，上游启 动子元件，控制转录起始频率 GC区：GGGCGG,位于-80～- 110，上游启动子元件， 控制转录起始频率 ;⑶启动子区的识别 原核生物：RNA聚合酶与-35区识别（σ因子 作用下） 真核生物：RNA聚合酶与CG区、CAAT区识别;⑷RNA聚合酶与启动子区的结合 原核生物：RNA聚合酶ββ’与-10区结合（σ 因子作用下） 真核生物：RNA聚合酶与TATA区结合（反式因 子作用下）;※增强子;;四 终止子与抗终止;新生RNA中出现发卡结构可导致RNA聚合酶暂停，破坏RNA-DNA杂合链5’端正常结构，寡聚U使杂合链3’端部分出现不稳定rU·dA区域。两者共同作用使RNA从三元复合物中解离出来。 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关。长度 ，效率 。;依赖于ρ因子的终止：ρ结合RNA富C区， 发挥ATP酶、解旋酶 活性，又称弱启动子 ※真核的转录终止：终止修饰点处切离加尾 有些终止点的DNA序列缺乏共性，不能诱导转 录的自发终止，需要ρ因子的参与。 大肠杆菌ρ-依赖型终止子占所有终止子的一 半左右。 ;※穷追模型;抗终止： 定义： 由于不同生理要求，转录过程中有时即 使遇到终止信号，仍需要继续转录的现象 两种类型： 破坏终止位点RNA的发夹结构：当介质中某一氨基酸的浓度较低时，缺乏相应氨酰-tRNA，将致