KlebisellaoxytocaHD79乙酸激酶部分.PDFVIP

中国农学通报 2015,31(14):83-88 Chinese Agricultural Science Bulletin KlebisellaoxytocaHD79乙酸激酶部分 基因(ack)的克隆与序列分析 1 1 1 1 1,2 叶广彬 ，宋 刚 ，凌宏志 ，葛菁萍 ，平文祥 1 （黑龙江大学生命科学学院，微生物省高校重点实验室，哈尔滨150080； 2 农业微生物技术教育部工程研究中心，哈尔滨150500） 摘 要：乙酸是2,3-丁二醇典型代谢途径中的主要副产物之一，它的大量生成能够造成环境pH 值的改变 并且抑制菌体的生长，并对2,3-丁二醇的代谢产生影响。乙酸激酶是乙酸生成的关键酶，敲除其相关基 因，理论上可以减少乃至消除乙酸的产生，从而提高2,3-丁二醇的产量和得率。本研究根据Klebisella oxytocaKCTC 1686和KlebisellaoxytocaHD79 乙酸激酶基因ack序列的相似性设计引物，以产酸克雷伯氏 菌基因组DNA 和质粒载体pT-ack为模板，利用PCR 克隆得到了乙酸激酶部分基因ack，长度为 856 bp ，无碱基缺失。ORF 分析发现该部分基因没有完整的开放阅读框，但是全部位于Klebisellaoxytoca KCTC 1686 ack基因的开放阅读框内。结果表明该片段为KlebisellaoxytocaHD79 乙酸激酶部分基因序 列，为后续构建产酸克雷伯氏菌乙酸激酶突变株奠定了基础。 关键词：产酸克雷伯氏菌；乙酸激酶；基因克隆；序列分析 中图分类号：TS252 文献标志码：A 论文编号：cas SequenceAnalysisandCloneofthePartialAcetateKinaseGene(ack)fromKlebisellaoxytocaHD79 1 1 1 1 1,2 YeGuangbin,SongGang,LingHongzhi,GeJingping,PingWenxiang 1 (KeyLaboratoryofMicrobiology,LifeScienceDepartment,HeilongjiangUniversity,Harbin150080; 2EngineeringResearchCenterofAgriculturalMicrobiologyTechnology,MinistryofEducation, HeilongjiangUniversity,Harbin150050) Abstract: Aceticacidisoneofthemajormetabolicby-productsin 2,3-butanediolclassicalmetabolic pathway.Productionof2,3-butanediolcanbeaffectedbysynthesisofnumerousaceticacidwhichwillleadto changingofenvironmentalpHandinhibitionofcellgrowth.Acetatekinaseisakeyenzymeinaceticacid metabolicpathway,knock-outofencodinggenesofacetatekinasewilltheoreticallydecreas