单克隆及多克隆抗体制备.pptVIP

抗体制备 一、免疫动物 动物选择：种类多。哺乳类或禽类。选择适龄、健壮的动物 原则：需要血清量、抗原从何种种属动物分离获得，需要单抗时，有多少抗原可使用。 常用种类：兔、小鼠、大鼠、豚鼠、中国仓鼠 商品用动物：猪、马、牛、羊 多抗制备常用兔（得到500ml血清！） 二、抗原 抗原及抗原剂量的选择：所用抗原应具备抗原特异性和较高的纯度。而且可被降解 抗原剂量根据其种类、免疫次数、注射途径及动物种类、免疫周期等不同。 抗原剂量过低或过高均不能诱导产生抗体 在一定范围内，抗体效价随注射抗原剂量而增高 抗原溶液最好为中性生理学缓冲液（如PBS） 从丙烯酰胺凝胶中纯化抗原：电泳后蛋白定位、制备凝胶碎片（对于大动物）、电洗脱凝胶、转膜（硝酸纤维素膜）后超声 半抗原：交联载体（BSA，KLH，蓝载体） 多肽抗原：肽长度、合成难度，肽的活动性。最安全的选择是制备多个不同区域的10-15个氨基酸的合成肽。偶联策略 小鼠：首次50-100ug/次；大鼠：100ug-1mg/次，兔0.5-1mg/次 加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5 高度特异性抗血清：策略为低剂量抗原短程免疫法 高效价的抗血清：策略为大剂量抗原长程免疫法。 三、佐剂的应用 颗粒性抗原或全细胞抗原不需要佐剂 可溶性抗原须用佐剂，以增强抗原的免疫原性或改变免疫反应的类型，刺激机体产生较强的免疫应答 佐剂种类：弗氏（Freund’