凝胶层析开法分离蛋白质2.pptVIP

凝胶层析法分离血红蛋白和溴酚蓝 【目的】 掌握凝胶层析的基本原理 学习利用凝胶层析法分离生物大分子和小分子的实验技能 【原理】 凝胶层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离的技术。 总结： 相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间向下流动，因此流程较短，移动速度快；所以首先流出。 相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔，可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，因此流程较长，移动速率慢；所以最后流出。 中等大小的分子，它们在凝胶颗粒内外部分渗透，渗透的程度取决于它们分子的大小，所以它们流出的时间介于二者之间，这样分子大的组分先流出，分子小的组分后流出。这样样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出，从而达到了分离的目的。 【实验器材】 层析柱 洗脱装置 试管等普通玻璃器皿 【实验试剂】 待分离样品：1。鸡血红蛋白：取新鲜抗凝全血5ml，于2000r/min离心10min，弃血浆，用三倍于血球体积的0.9﹪Nacl溶液洗血球（颠倒混匀）。离心弃去上清液，重复1～2次，至上清液清亮为止。于血球中加入10倍体积的蒸馏水，混匀，使血球破碎，过滤，即得血红蛋白溶液。2。 1mg/ml溴酚蓝溶液 (待分离样品老师已准备好) 葡聚糖凝胶 Sep