二 双水相萃取..pptVIP

萃取是生物分离中常用的单元操作 分配系数 衡量萃取体系是否合理的重要参数： y-----平衡时溶质在轻相中的浓度 X-----平衡时溶质在重相中的浓度 双水相萃取 (Aqueous Two Phase Extraction) 双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相容性，当聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不互溶的两相。 因使用的溶剂是水，因此称为双水相，在这两相中水分都占很大比例(85％一95％)，活性蛋白或细胞在这种环境中不会失活，但可以不同比例分配于两相，这就克服了有机溶剂萃取中蛋白容易失活和强亲水性蛋白难溶于有机溶剂的缺点。 双水相萃取（aqueous two-phase extraction）具有收率高、成本低、可连续化操作等技术优势，因而已被广泛应用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域，进行生物转化，蛋白质、核酸等产品的分离纯化。用此方法提纯的酶已达数十种，其分离也达到了相当规模。近年来又进行了双水相萃取氨基酸类和病毒小分子物质的研究，大大扩展了应用范畴并提高了选择性，使双水相萃取技术具有更大的潜力和美好的发展前景。 双水相萃取的优点(二) 操作条件温和，在常温常压下进行； 两相的界面张力小，一般在10-4N／cm量级，两相易分散; 两相的相比随操作条件而变化； 易于连续操作，处理量大，适合工业应用。 常见双水相系统 双聚合物体系 聚乙二醇/葡聚糖（PEG/Dextran） 聚丙二醇/聚乙二醇 甲基纤维素/葡聚糖体系 单聚合物-盐体系 聚乙二醇/硫酸钾体系（PEG/KPi） 聚乙二醇/磷酸铵体系 聚乙二醇/硫酸钠体系 生化分离方法比较 双水相的形成 亲水性的聚合物溶液 熵增——混合——自发 与分子数目有关 分子间作用力 与分子大小有关 聚合物的不相容性------含有聚合物分子的溶液发生分相的现象. 相图:相平衡时物系的组成,温度与压力的关系. 双水相的形成 双水相系统(aqueous two-phase system, ATPS) 杠杆规则：系线上各点均为分成组成相同，而体积不同的两相。两相体积近似服从杠杆规则； B) 性质差异：系线的长度是衡量两相间相对差别的尺度,系线越长,两相间的性质（密度）差别越大；反之则越小； C) 临界点(critical point)：当系线长度趋于零时, 两相差别消失,任何溶质在两相中的分配系数均为1。如S点。 道南电位（Donnan Potential）当带有电荷在两相中分配不相等时（即分配系数不为1.0），就会在两相之间产生电位差，称为道南电位 双水相萃取-无机盐的分配 相间疏水因子(HF, hydrophobic factor) PEG/DX和PEG/KPi等ATPS上相(PEG相)疏水性较大,相间的疏水性差用HF表示. HF可通过测定疏水性已知的蛋白质在其pI处的maa测算: RH-aa相对疏水性(relative hydrophobicity).是通过测定蛋白质在水和已醇中溶解度的差别确定的,并设疏水性最小的Gly的RH=0.所以,上式中的B为: mGly为Gly分配系数. 所以, pH=pI时aa在ATPS中的分配系数与其RH值呈线性关系,直线的斜率就是该双水相系统的HF值.图为测定实例。 Pro表面疏水性(HFS, HF of surface) 利用上式可确定不同ATPS的HF值.如在pH = pI的ATPS中, pro的m0与HF值之间呈线性关系, 则直线的斜率定义为该蛋白质的HFS 图为蛋白质的m0与HF的实测关系图。图的结果示：pro的HFS随NaCl浓度的增大而增大。将盐对pro的HF影响上式得： 其中?HFSsalt为盐增加而引起的HFS值增量。因此，m的一般形式 存在问题：当系线长度增加时,系统的表面张力增大,可能导致溶质在界面上的吸附。这种现象在处理含细胞和固体微粒的料液时尤为严重，细胞或固体微粒容易集中在界面上，给萃取操作带来因难，但对于可溶性蛋白质，这种界面吸附现象很少发生,一般可不考虑。 3)、pH value A B 交错分配法(cross partitioning): 当加入不同种类的盐时，由于相间电位不同，lnm–pH关系曲线也不一样。但在pro的pI处，由于Z=0，m应相同，即两条关系曲线交于一点。所以, 通过测定不同盐类存在下 lnm–pH曲线的交点,可测定蛋白质\细胞器以及微粒的pI。 C pH影响磷酸盐解离：即影响PEG/Kpi系统的相间电位和蛋白质的分配系数。对某些pro, pH的很小变化会使m改变2~3个数量级。 聚