琼脂糖凝胶电泳.pptVIP

一、实验原理 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 四、实验步骤 (一)制胶 1.准备好凝胶成型器，插入成型梳。 2.将1g琼脂糖加至100 ml 0.5×TBE缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至60℃以下。 3.加入50ul溴化乙锭替代品（终浓度0.5ug/ ml ）至熔化的琼脂糖液中混匀，但避免出现气泡。 4.将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器，制备凝胶。 （二）电泳 1.待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约20分钟），小心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加0.5×TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm。 2.用移液器吸取2μl 的6X载样缓冲液于封口膜上，再加入5μl样品，混匀后，小心加入点样孔。 3.接通电源，调节电压至4-5V/cm，DNA从负极移到正极。电泳时间30－60分钟。 4. 电泳结束，关掉电源。 图1 基因组DNA1%琼脂凝胶电泳图 图2　 PCR产物琼脂凝胶电泳图 (1、2、3、4为PCR产物，M为DL2000Marker) * * 实验1.3 琼脂糖凝胶电泳 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。 琼脂糖浓度(%) 线型DNA分子的分离范围(Kb) 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.9～6 1.5 0.2～3 2.0 0.1～2 二、实验目的 通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和技术。 　基因组DNA、质粒DNA 　电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头， 　 微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，电泳缓冲液，溴化乙锭（EB）， 6X载样缓冲液 ： Ⅰ0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青、40%蔗糖水溶液; Ⅱ0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，30%甘油水溶液 三、实验材料、器具及药品 微波炉 实验仪器 凝胶电泳槽 凝胶成像系统 1. 将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统 的平台中间； 2. 开通紫外光，可见到发出荧光的DNA条带，在 电脑中观察图像； 3. 关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像； 4. 根据图像结果判定基因型。 五、结果分析 DNA存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带 植物总（核）DNA样品应呈现一条迁移率很小的整齐条带。 质粒DNA应呈现一到三条不同构型的条带，这时表明所提样品较纯。溴酚蓝前的荧光区是样品中存有的RNA杂质。若质粒DNA样品在迁移率小的地方还有荧光条带，表明质粒DNA样品中有细菌的染色体DNA污染。