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第二章 基因工程 一、绪论 1、什么是基因？如何分类？什么是基因表达？ 2、什么是基因工程？它产生的背景是什么？它的理论及意义是什么？ 1、什么是基因？如何分类？ 什么是基因表达？ （1）、不少教科书给基因下的定义是：基因是脱氧核糖核酸（DNA）分子上的一个特定的片段。 基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列（或核酸片段），它是控制生物性状的功能和结构单位。 （2）、根据是否转录和翻译功能可分三类： 一类是既有转录功能又有翻译功能的基因，这类基因是指编码酶和结构蛋白质的结构基因及编码阻 蛋白的调节基因（统称为蛋白质基因）；这也是人类基因组计划中所的功能基因（26383—39114个）。 第二类是只有转录功能而没有翻译功能的基因，包括编码tRNA和rRNA的基因； 第三类是既不转录也不翻译的基因，包括启动基因、操纵基因、增强子等（有时也把它称为调控基因）。 （3）、所以基因表达不能说就是遗传信息经转录和翻译从（DNA）传蛋白质的过程。 基因表达：是基因表现其生物功能所经历的一系列分子转化和相互作用的过程。 2、什么是基因工程？它产生的背景是什么？它的理论及意义是什么？ （1）、基因工程：应用DNA重组技术，按照人们的意愿，在基因水平上改变生物的遗传性，创造新生物物种，通过工程化为人类提供有用产品及服务的技术。 遗传工程：是包括基因工程在内的人工改造生物遗传性的全部技术； DNA重组技术：是采用酶法，将不同来源 DNA进行体外切割与连接构成杂种DNA分子： 分子克隆：主要是指DNA分子在宿主细胞内的复制过程。三者之间有关系。但是有不同。 （2）、一方面是科学发展的必然要求（当时育种工作、癌等的治疗都要求科技应有所突破）； 另一方面是有关基因结构与功能的基础理论研究的重大突破和技术的必然结果。 （3）、意义：基因重组技术使人类可以打破物种之间遗传物质转移交换的天然屏障；跨越生物远缘不能杂交的鸿沟，使人类有计划、有目的地进行在物种间甚至在动物、植物、微生物之间的基因杂交，达到有选择和定向性改变生物的基本性状，或融合进人们所需的优良性状，从而获得新的生物制品或制造出新的物种。更为重要的是可以运用基基因工程技术方法去了解基因的功能以及基因调控的机理等一系列理论问题。另外在人类基因图谱绘制完成后，将有可能为人类征服各种疾病开辟新的途径。 一、基因工程的基本工具 基因工程的基本工具：工具酶、基因运载体和受体细胞。 （一）、工具酶：基因工程中所使用的酶类。 1、限制酶：凡能识别和切割双螺旋DNA分子内特定核苷酸顺序的酶类，全称是限制性核酸内切酶或限制性内切酶核酸。 （1）、限制酶的命名：是根属名和种名相结合的原则。 如：来自Haemophilus aeygtius(埃及嗜血杆菌)的三种酶为：HaeⅠ 、HaeⅡ、HaeⅢ; Haemophilus influenzae Rd(流感嗜血杆菌)的三种酶为： HindⅠ 、HindⅡ、HindⅢ; Haemophilus influenzae Rf的三种酶为： HinfⅠ 、HinfⅡ、HinfⅢ; 当同属不同种的两种菌名前两个字母完全相同时，则其中一种的酶的符号改用种名词头后第一个字母（小写）代替三字母中最后一个字母如：Haemophilus parainfluenzae 的二种酶为： HpaⅠ 、HpaⅡ;而Haemophilus parahaemolyticus 的二种酶为： HphⅠ 、HphⅡ。 （2）、限制酶的分类： 第一型为单一多功能酶，由三种不同的亚基组成，辅因子为ATP、Mg2+及S-腺苷蛋氨酸，其甲基化位点与识别位点相一致，切割后产生的DNA片段5‘-末端去掉磷酰基后形成的羟基末端不能作为多核苷酸激酶磷酸化的底物，所以不宜作为工具酶。 第二型 限制酶由两个相同的亚基组成，分子量在2-10万道尔顿之间，仅具有限作用，辅助因子仅为Mg2+，识别位点具有旋转对称性，切割位点与识别一致，其底物为双螺旋DNA。它是基因工程的理想工具酶。 第三型限制酶由两种亚基组成，具有双重功能，辅因子为ATP、Mg2+，也受S-腺苷蛋氨酸激活，但不是必需。具有特定识别顺序，甲基化位点与识别位点相一致，其功能还有待研究。 第二型限制酶的特点： （1）、具有很强的底物专一性，其底物只能是双链DNA分子，对单链RNA及双链DNA-RNA杂交分子均不起作用； （2）、具有很强的位点专一性，它的识别位点为4-7核苷酸序列，甲基化位点就是识别位点，识别位点也切割部位； （3）、位点上核苷酸顺序通常呈双重螺旋结构。 其切割 方式有三种： EcoRⅠ ： 5’—GAATTC—3’ 3’—