病理科切片及染色方法和问题(1)..pptVIP

病理科切片及染色方法和职业暴露的预防 病理科：黄山 石蜡切片的步骤 ①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。?②将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。? ③摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。? ④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。?⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为4-10微米。? ⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-50r/min。? ⑦切成的蜡带到20-30cm长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。?⑧用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。? ⑨切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭　　干净妥为保存。 切片结束后的捞片 　　展片、贴片? 打开水浴锅，使水温维持在40-45℃，另准备30%乙醇溶液。?①?切片时，将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。? ②?用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在乙醇溶液的水面上，使切片展开。?③小镊子轻轻地将连在一起的切片分开，用一个载玻片将切片完整，已展开的切片捞至温水中，使之充分展开。? ④?另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片1/3处，另一端（磨边，粗糙的一端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。?10.?脱蜡复水? ????将水浴锅温度调至60℃，待水温控制在60℃时，将切片连同切片架放入一干燥的染色缸内，放入水浴锅中，盖上盖子（可密封），30min至蜡熔化。? 莱卡rm2235切片机 莱卡切片机 石蜡切片的关键点 1、时刻注意保护好自己，切片刀非常锋利，小心被割伤。 预防方法？ 2、如何才能切出满意的病理切片？ a，爱护机器。b、取材脱水合适。c、切片厚度也很重要。d、切片方法（非常重要）。 e、多做练习，多多观察，发现不同组织不同的切片方法。 一些组织的切片方法 1、脂肪多的组织。（乳腺、淋巴结、脂肪瘤） 2、过脆的组织（肝脏、脾脏） 3、过硬的组织（骨组织，钙化组织） 4、小组织。 5、某些皮肤组织。 水浴锅捞片的关键点 1、水温。（47-50°） 2、如何选择最合适的切片。 3、出现皱褶如何解决。 4、如何才能杜绝捞片中发生的污染。 切片结束后HE染色的步骤 1、二甲苯脱蜡??????????????????????????两道，每道10分钟? 2、无水乙醇????????????????????????????Ⅰ?5min? Ⅱ?5min? 3、95%乙醇????????????????????????????Ⅰ?5min? Ⅱ?5mn? 4、水洗 ?5、苏木素液???????????????????????3-5min（冬天可适当延长）? 6、水洗? 7、0.5%盐酸酒精分色????????????????????3~10seconds，镜下观察?8 、水洗蓝化???????????????????????????3~5min（注意换水）? 9、95%乙醇????????????????????????????1min? 10、伊红液染色??????????????3~30seconds? 11、梯度酒精，70%一直到无水酒精。? 12、二甲苯??两步?透明???????????????????????? ?13、中性树胶封片。? HE染色后切片会遇到的一些问题 1、苏木素染色不满意，核不蓝或者过染。 2、伊红染色不满意，过红或者过淡。 3、切片白色不透明，非常的脏。 4、镜下观察组织上有气泡。 5、镜下发现细胞核上有黑点，类似芝麻点。 6、组织朦朦胧胧，结构不清。 如何解决这些问题？ 1、苏木素和伊红染不上色或者过染是什么原因造成的，如何解决？ 2、什么原因造成的切片白色，非常的脏。如何解决？ 3、如何减少切片上的气泡。 4、如何减少细胞核上的芝麻点。 5、染色试剂如何更换。 结束语：制作良好的石蜡切片是一个非常复杂的过程，它需要从取材开始一直到最后封片所有步骤都不能出问题，想做出一张完美的病理切片需要做个有心人。 * *