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医学研究生学报 ２０１８年６月 第３１卷 第６期 Ｊ Ｍｅｄ Ｐｏｓｔｇｒａ，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．６，Ｊｕｎｅ，２０１８ ·５６５ ·
论 著
（基础研究）
蛋白质精氨酸甲基转移酶５对人卵巢癌 ＨＯ８９１０ 细胞
增殖能力的影响
魏 野，王冉冉，韩田田，赵康荣，林 琼，邵根宝
［摘要］ 目的 蛋白质精氨酸甲基转移酶５（ＰＲＭＴ５）可通过表观遗传或翻译后甲基化修饰的方式参与众多的生物学调
控。 文中旨在探讨ＰＲＭＴ５对卵巢癌ＨＯ８９１０ 细胞增殖能力的影响。 方法 利用瞬时转染的方法获得 ＰＲＭＴ５过表达的
ＨＯ８９１０ 细胞株，分为空白对照组（野生型ＨＯ８９１０细胞株）、阴性对照组（转染ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ质粒的ＨＯ８９１０细胞）、实验组（转染
ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５质粒的ＨＯ８９１０细胞）。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测３组细胞标签蛋白ｍｙｃ 的表达，ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测３组细胞ＰＲＭＴ５
ｍＲＮＡ 的表达。 另利用ｓｈＲＮＡ干扰方法建立诱导型稳定敲低ＰＲＭＴ５基因的ＨＯ８９１０细胞株，分为ｐＬＫＯ对照组（感染空载体
＋ ＋
慢病毒）、ｐＬＫＯ Ｄｏｘ（１００ｎｇ／ ｍＬ）组、ｓｈＰＲＭＴ５组（感染ＰＲＭＴ５⁃ｓｈＲＮＡ慢病毒组）和ｓｈＰＲＭＴ５ Ｄｏｘ（１００ｎｇ／ ｍＬ）组。 用不同浓
度梯度的Ｄｏｘ诱导敲低（Ｄｏｘ ０ｎｇ／ ｍＬ、１ｎｇ／ ｍＬ、１０ｎｇ／ ｍＬ、１００ｎｇ／ ｍＬ）４８ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测ＰＲＭＴ５ 的蛋白和ｍＲＮＡ
＋
的表达。 克隆形成实验、ＥｄＵ实验、ＣＣＫ⁃８实验检测细胞增殖能力；实验细胞分为Ｄｏｘ⁃组、Ｄｏｘ 组、ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ组、ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃
ＰＲＭＴ５组。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测细胞ＰＲＭＴ５ 的表达对增殖相关蛋白的影响。 结果 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示，空白对照组和阴
性对照组均无标签蛋白ｍｙｃ 的表达，而实验组检测到ｍｙｃ 的表达，ｑＲＴ⁃ＰＣＲ检测实验组ＰＲＭＴ５ ｍＲＮＡ表达远高于空白对照
＋
组和阴性对照组（Ｐ＜０．０１）。 与ｐＬＫＯ对照组细胞中ＰＲＭＴ５ 的蛋白表达水平（１．０５±０．１１）比较，ｓｈＰＲＭＴ５ Ｄｏｘ组（０．３２±０．２５）
＋
和ｓｈＰＲＭＴ５组ＰＲＭＴ５ 的蛋白表达（０．８９±０．１８）显著减少（Ｐ＜０．０５）。 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ结果同样显示，ｓｈＰＲＭＴ５ Ｄｏｘ较 ｓｈＰＲＭＴ５组
ＰＲＭＴ５ ｍＲＮＡ表达显著降低（Ｐ＜０．０１）。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和ｑＲＴ⁃ＰＣＲ证实ＰＲＭＴ５在用 Ｄｏｘ １０ｎｇ／ ｍＬ（０．２１±０．２４）和 １００ｎｇ／ ｍＬ
＋
（０．０８±０．１５）诱导后相较于无Ｄｏｘ处理显著下调（Ｐ＜０．０５）。 Ｄｏｘ⁃组细胞形成的克隆数［（１６１±１５）个］显著高于Ｄｏｘ 组细胞克
隆数［（７３±８）个］，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。 ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ⁃ＰＲＭＴ５组克隆数［（１９３±１５）个］明显高于ｐＣＭＶ⁃ｍｙｃ组克隆
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