第二章蛋白质化学(1)氨基酸..pptVIP

* * * * * * （二）紫外吸收性质： 只有芳香族氨基酸有紫外吸收能力 Lambert-Beer 定律 紫外区（200—400nm）：Tyr/Trp/Phe 原因：-C=C-C=C-C=C-C=C- Trp 280nm Tyr 275nm Phe 257nm 蛋白质含量测定 280nm （三）化学性质 1、氨基酸的两性性质和等电点 氨基酸是两性电解质，其解离方式和程度取决于所处溶液的酸碱度。 (1)等电点(isoelectric point, pI) 在某一pH溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。氨基酸等电点的特点：净电荷为零，在电场中不移动；此时氨基酸的溶解度最小。 pH=pI +OH- pHpI +H+ +OH- +H+ pHpI 氨基酸的兼性离子 阳离子 阴离子 (2)等电点pI计算公式 氨基酸的pI 是由α-羧基和α-氨基的解离常数的负对数决定的。对侧链R基不解离的中性氨基酸来说： pI=1/2（pK1+pK2) pK1为α-羧基的解离常数 pK2为α-氨基的解离常数 中性氨基酸：以Gly为例 K1= [Gly±] [H+] [Gly+] K2= [Gly- ] [H+] [Gly±] pI时， [Gly+ ] = [Gly- ] [Gly±] [H+] K1 = [Gly±] K2 [H+] [H+]2=K1K2 pH=（pK1+pK2）/2 pI=（pK1+pK2）/2 pI =（2.34+9.60）/2=5.97 Gly ②酸性氨基酸的pI (Asp) ③碱性氨基酸的pI (Lys) 氨基酸的pI 酸性氨基酸：pI = (两个小的pK值 )/2 碱性氨基酸：pI = (两个大的pK值 )/2 侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK′1和pK′2的算术平均值；对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK′值的算术平均值。 中性氨基酸：pI = (pK′1 + pK′2 )/2 所以，等电点的pH与离子浓度无关，其值取决于两性离子两边的pK值。 处于等电点时的氨基酸溶解度最小，导电性最小，粘度、渗透性最小。 在等电点以上的任何pH，氨基酸带净负电荷，在电场中将向正极移动； 结论： 在低于等电点的任何pH，氨基酸带净正电荷，在电场中将向负极移动。 在一定pH范围内，氨基酸溶液的pH离等电点愈远，氨基酸所携带的净电荷愈大。 氨基酸的酸碱性质 以弱酸HA为例，其解离常数为Ka Ka = [ H+][A-]/[HA] 两边取对数：lgKa = lg [H+] + lg ([A-]/[HA]) 由于-lgKa = pKa 所以pKa = pH - lg ([A-]/[HA]) = pH + lg ([HA]/[A-]) 故溶液pH=pKa+lg ([A-]/[HA])=pKa+lg(碱/共轭酸) [A-]和[HA]互为共轭酸碱对，即[A-]为[HA]的共轭碱，反过来， [HA]是[A-]的共轭酸，可以用来估算缓冲体系的pH HA A- + H+ 亨德森-哈塞尔巴尔赫(Henderson-Hasselbalchd)方程 例题： Gly的-NH3+有1/3解离时，溶液的pH值？ pH = pK2 + lg ([Gly-] / [Gly0]) pH = 9.6 + lg (1/2) pH = 9.3 （三）AA的化学性质 氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。 2、氨基酸的化学反应 （1）茚三酮反应 与α-NH2、α-COOH和R侧链基团有关，多用于氨基 酸分析鉴定。 茚三酮 水合茚三酮 + 3H20 水合茚三酮(无色) NH3 CO2 RCHO + 还原型茚三酮 (弱酸) 加热 水合茚三酮 + NH3 + 还原型茚三酮 蓝紫色化合物 λmax = 570nm 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，其余所有的α-氨基酸与茚三酮反应均产生蓝紫色物质。 加热 黄色，λmax = 440nm （2）与甲醛反应：氨基酸的甲醛滴定 OH- 中和滴定 NaOH 羟甲基氨基酸 二羟甲基氨基酸 判断蛋白质水解或合成的进度 （3）与2,4二硝基氟苯(DNFB)反应