第九章碳水化合化物的测定.pptVIP

第九章 碳水化合物的测定 一、 测定方法概述 物理法（密度法、折光法、旋光法） 还原糖法（蓝爱农法、直接滴定法、 高锰酸钾法、斐林氏法、 单糖 铁氰化钾法、二硝基水杨酸比色法） 低聚糖 碘量法 (测定醛糖） 色谱法 气相色谱法 液相色谱法 酶法 葡萄糖氧化酶→葡萄糖 β—半乳糖脱氢酶→半乳糖、乳糖 淀粉 水解成单糖→测定， 旋光法 多糖 果胶 重量法，比色法 纤维 重量法 二、可溶性糖类的提取和澄清 1、提取液制备 （1）常用提取剂——水、乙醇 （2）提取液中含糖量控制0.5～3.5mg/mL （3）含脂肪食品先脱脂，然后用水提取 （4）含淀粉及糊精食品（乙醇沉淀淀粉等）用70～75％乙醇溶液提取 （5）含乙醇及CO2液态食品，蒸发至1/3～1/4原体积，以除去C2H5OH及CO2 （6）酸性食品应先中和防止低聚糖部分水解 （7） 提取固体样品有时需要加热，以提高提取效果。一般在40～50℃，防止多糖溶出 （8） 乙醇作提取剂加热时应安装回流装置 2、提取液的澄清 （1）影响测定的杂质 色素、蛋白质、果胶、可溶性淀粉、有机酸、氨基酸、 单宁，可影响颜色、浑浊、过滤困难 （2）澄清剂 ①醋酸铅（中性）Pb（CH3COO）2·3H2O，形成沉淀，吸附杂质，可除去蛋白质、果胶、有机酸、单宁等。 ②乙酸锌和亚铁氰化钾二者生成氰亚铁酸锌↓吸附蛋白质等干扰物 ③硫酸铜和氢氧化钠 Cu离子使蛋白质沉淀 （3）澄清剂用量 用量适宜，以无新沉淀为准，如2ml饱和醋酸铅（30％） （4）除铅剂 由于铅影响还原糖的测定，生成铅糖化合物 常用除铅剂有草酸钠、硫酸钠、磷酸氢二钠 三、蓝—爱农（Lane-Eynon）法 测定还原糖 （国际上常用的定量糖的方法） 1、原理 斐林试剂甲液（CuSO4·5H2O） 斐林试剂乙液（酒石酸钾钠+NaOH） 甲、乙混合→酒石酸钾钠合铜 酒石酸钾钠合铜+葡萄糖 → 葡萄糖酸 + Cu2O↓(红棕) 终点的确定： 葡萄糖+亚甲基蓝（氧化态）→亚甲基蓝（还原态） 过量 兰色 无色 （兰色消失） 终点时的颜色为：兰色消失了的红棕色 2、测定 ①预测 准确吸取斐林试剂甲液5.00mL、乙液5.00mL→锥形瓶中，△至沸腾，再加入亚甲基蓝指示剂，在加热的条件下，用样液滴至蓝色褪尽。（先快后慢，要求很快达到终点，因为亚甲基蓝易被空气氧化为蓝色，且要求在加热的情况下以除去空气） ②测定 甲液5mL、乙液5mL→锥形瓶中，加入比上述预测量少0.5～1ml样液在2min内沸腾，维持沸腾2min，加入3滴亚甲基蓝指示剂，再在3min内滴定至蓝色褪尽。 3、计算 F 还原糖 % = --------------------- ×100 ( V1/V ) × m m--样品质量，mg；V1--滴定量mL；V--样液总mL； F--还原糖因素，10mL费林试剂，相当的还原糖量mg F的求得有两种方法： A、用标准还原糖液用上面同样方法标定10ml费林试剂求得。 B、查蓝—爱农法专用“还原糖因数表”附表 例 若V1=26 则F=49.9 四、直接滴定法测定还原糖 1、原理 （GB/T5009.7-1985) 斐林试剂甲液（CuSO4·5H2O+亚甲基蓝），斐林试剂乙液（酒石酸钾钠+NaOH+亚铁氰化钾，混合→酒石酸钾钠合铜，酒石酸钾钠合铜+葡萄糖→葡萄糖酸 + Cu2O↓(红棕)，亚铁氰化钾使Cu2O↓（红棕）生成无色络合物K2Cu2Fe(CN)6。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH 红棕 无色 终点的确定：葡萄糖+亚甲基蓝（氧化态）→亚甲基蓝（还原态 过量 兰色 无色 2、测定 ①碱性酒石酸铜溶液的标定 （乙液（内有亚铁氰化钾） 取甲、