2012高考生物一轮复习人教版选专修三课件1.pptVIP

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有____________、__________、____________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行________________。 (2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是______________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ______________，其合成的产物是 __________________。 (4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_______________。 解析：(1)在基因表达载体的构建过程中用同种限制酶来切割目的基因和质粒，使之产生相同的黏性末端，以利于DNA片段的连接。将切割后的目的基因和质粒，用DNA连接酶进行连接，它们之间随机连接，可有三种产物：目的基因—载体连接物、载体—载体连接物和目的基因—目的基因连接物。获得DNA连接产物以后，必须通过筛选才能获得所需的基因表达载体，导入宿主细胞后才能表达获得基因产物。 (2)从图中可以看出，目的基因的插入位点在抗四环素基因上，可推知：目的基因—载体连接物的抗四环素基因被破坏，丧失了抗四环素的能力，但保留了抗青霉素的能力；载体—载体连接物既保留了抗四环素的能力也保留了抗青霉素的能力；目的基因—目的基因连接物既无抗青霉素基因也无抗四环素基因，不具备抗性。(3)目的基因表达过程中，RNA聚合酶首先与启动子结合，指导目的基因转录产生mRNA，mRNA再指导蛋白质的合成。 (4)若只用EcoRⅠ(或只用BamHⅠ)切割质粒及目的基因，连接时有三种产物，所以在实际操作过程中，为避免切割后的末端任意连接，可用EcoRⅠ和BamHⅠ同时对目的基因和质粒进行切割，目的基因两端的黏性末端不同，就不存在目的基因—目的基因连接物；质粒切口处两端的黏性末端不同，就不存在载体—载体连接物，只能得到目的基因—载体一种连接物了。 答案：(1)目的基因—载体连接物、载体—载体连接物目的基因—目的基因连接物分离纯化(2)载体—载体连接物目的基因—载体连接物、载体—载体连接物(3)启动子mRNA(4)EcoRⅠ和BamHⅠ 解析：质粒与目的基因结合时需要用同一种限制性内切酶切割，切出的黏性末端相同，可用DNA连接酶连接；愈伤组织由相同的细胞分裂形成，分化后产生相同基因型的植株；卡那霉素抗性基因作为标记基因不能有限制性内切酶的切割位点，标记基因被切断后不再表达；抗虫棉为杂合子，其有性生殖后代可能会发生性状分离，抗虫性状不一定能稳定遗传。 答案：A 题型一　　基因工程的基本工具 【例1】　如图为DNA分子的切割和连接过程： (1)EcoRI是一种________酶，其识别序列是________，切割点是________与________之间的________键。切割结果产生的DNA片段末端形式为________。 (2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是________连接酶，此酶是通过在________与________之间形成________键，而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是________。 【标准解答】　本题考查DNA限制酶和DNA连接酶的有关知识。(1)从图中可看出EcoRI可将DNA片段切割，应为限制酶，其识别序列是GAATTC，切点是G与A之间的磷酸二酯键，切割后产生的是黏性末端。(2)DNA连接酶可将不同来源的DNA片段结合，由图中可看出，此酶是通过在G与A之间形成磷酸二酯键的形式连接两片段，连接的黏性末端，对应前面的EcoRI限制酶，此酶应为E·coliDNA连接酶，T4DNA连接酶可连接平末端。 【答案】　(1)限制　GAATTC　鸟嘌呤脱氧核苷酸(或G)　腺嘌呤脱氧核苷酸(或A)　磷酸二酯　黏性末端 (2)E·coliDNA　鸟嘌呤脱氧核苷酸(或G)　腺嘌呤脱氧核苷酸(或A)　磷酸二酯　T4DNA连接酶 题型二　　　基因工程的基本操作程序 【例2】　科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示。根据题意，回答下列问题： (1)基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是：________、________、________、________。 (2)Ti质粒