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2019-01-08 发布于河北
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软琼脂克隆形成实验.ppt

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软琼脂克隆形成实验

PART COMPANY PART COMPANY * 软琼脂克隆形成实验（Soft Agar Assay）软琼脂克隆形成实验一、实验原理某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆能力反映其恶性增殖程度，这种方法可用于细胞分化的基础研究和临床肿瘤治疗检验等方面。让细胞处于不贴壁以及单细胞状态，模拟体内细胞处于半固液的情况，在此情况下检测细胞的增殖能力。单细胞处于软琼脂中，就如同胰酶消化后的状态，此后，细胞继续增殖分裂，形成单克隆。软琼脂培养法常用来检测肿瘤细胞和转化细胞的增殖能力。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。软琼脂克隆形成实验二、实验方法配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55℃的水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。配制含20%FBS、2X双抗PS的2X1640培养基，用0.2微米的滤器过滤除菌。铺下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2X培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔1.5mL,室温等其凝固。细胞计数：将细胞用PBS的洗一遍，用胰酶消化终止后离心，加入新的培养基混匀稀释，调整细胞浓度为5X104/mL,每孔加入100uL的细胞悬液。软琼脂克隆形成实验铺上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2X培养基1:1混合，加入100uL的细胞悬液，即5000个细胞，混合均匀后，每孔加入1.5mL。放入37℃，CO2培养箱培养，隔三天后补加培养基，约3周后收细胞。计数比较对照组与实验组的细胞数量，最后进行分析，计算单克隆形成率。软琼脂克隆形成实验三、注意事项软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40℃。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞（如正常成纤维细胞）在悬浮状态下不能增殖，不适用此种方法。 PART COMPANY PART COMPANY *