犬上颌窦黏膜干细胞的培养和成骨性能的鉴定-口腔疾病防治.PDFVIP

·422 · 口腔疾病防治 2018年7月 第26卷 第7期 ［DOI］10.12016/j.issn.2096⁃1456.2018.07.003 ·基础研究 · 犬上颌窦黏膜干细胞的培养和成骨性能的鉴定 1 2 2 2 3 2 张静 ， 朱双喜 ， 彭伟 ， 李祥 ， 荣琼 ， 陈松龄 1. 广州中医药大学祈福医院口腔科，广东 广州（511495）； 2. 中山大学附属第一医院口腔科，广东 广州 （510080）；3.云南省第一人民医院口腔科，昆明理工大学附属医院口腔科，云南 昆明（650032） 【摘要】 目的 探讨犬上颌窦黏膜干细胞的成骨性能。方法 取健康Beagle犬上颌窦黏膜，免疫磁珠法分选 CD146阳性细胞，培养犬上颌窦黏膜干细胞。流式细胞术检测一代细胞的表面抗原CD146和CD44、CD34。 犬上颌窦黏膜干细胞经基础培养（基础培养组）和成骨诱导培养（成骨诱导组）后，应用Real⁃timePCR、免疫组 化法检测2组成骨相关基因mRNA和蛋白的表达，应用ALP测试盒检测碱性磷酸酶（alkalinephosphatase, ALP）活性，应用茜素红染色、VonKOSSA染色观察成骨诱导后矿化结节的形成。结果 成功培养犬上颌窦黏 膜干细胞，流式细胞术检测显示CD146和CD44阳性、CD34阴性。成骨诱导组犬上颌窦黏膜干细胞Runt相关 转录因子2（runt⁃relatedtranscriptionfactor 2，RUNX2）（t = 14.44，P 0.001）、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）（t = 7.85，P =0.001）和ALPmRNA（t = 14.27，P 0.001）表达量明显高于基础培养组，差异均有统计学意义；成骨 诱导组RUNX2和OPN蛋白表达水平增强。犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后，与基础培养组相比，ALP活性 增高，3d（t =8.79，P 0.001）、7d（t =9.75，P 0.001）、14d（t = 12.14，P 0.001）、21d（t = 19.62，P 0.001）、 28d（t = 17.53，P 0.001）时，成骨诱导组明显高于基础培养组；犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后茜素红和 VonKOSSA染色可见到明显的矿化结节。结论 犬上颌窦黏膜干细胞具有成骨能力。 【关键词】 上颌窦黏膜； 干细胞； 成骨； 碱性磷酸酶； Runt相关转录因子2； 骨桥蛋白； 矿化结节 【中图分类号】 R783.4 【文献标志码】 A 【文章编号】 2096⁃1456(2018)07⁃0422⁃06 【引用著录格式】 张静,朱双喜,彭伟,等.犬上颌窦黏膜干细胞的培养和成骨性能的鉴定[J]. 口腔疾病防治, 2018,26(7):422⁃427. Culture and identification of the osteogenic properties of beagle maxillary sinus membrane stem cells 1 2 2 2 3 2 ZHANGJing,ZHUShuangxi,PENGWei,LIXiang,RONGQiong,CHENSongling. 1.DepartmentofStomatology, CliffordHospital,GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou 511495,China;2.DepartmentofStomatology, FirstAffiliatedHospital,SunYat⁃senUniversity,Guangzhou 510080,China; 3.DepartmentofStomatology,FirstPeo⁃ ple’sHospitalofYunnanProvince,AffiliatedHospitalofKunmingUniversityofScienceandTechnology,