白细胞分离技术.doc

第二节 多形核白细胞的分离 基本原理 本实验是根据不同的细胞之间其密度不同的原理，通过速度沉降法对外周血多形核白细胞进行分离。 试剂与器材 ·抗凝血 ·葡聚糖T500（商品） ·聚蔗糖（密度d=1.077g/ml，商品） ·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭活） ·2g/L、9g/L、20g/L NaCl溶液 ·含1-5%胎牛血清的PBS液（无Ca2+） ·4g/L台盼蓝染液（溶解在PBS液中） ·50ml聚丙烯圆锥管 ·毛细吸管 ·有旋转桶转子装置的离心机 ·10ml吸管，吸球 ·光学显微镜，细胞计数板 ·超净台（如果需要无菌条件） 操作步骤 一．红细胞的沉降 1．将葡聚糖T500用9g/L NaCl溶液配成30g/L的溶液（W/V）。 （图1） 葡聚糖T500 葡聚糖 T500 ＋ 血 白细胞悬液 白细胞悬液 沉降 沉降 红细胞 红细胞 图 图1 2．将25ml的抗凝血与等体积的30g/L葡聚糖溶液在聚丙烯管中混匀。 3．将聚丙烯管置于室温中45分钟进行红细胞自然沉降。 4．将富含白细胞的上清液转移至另一个50ml的管中。 5．室温，200×g离心10分钟。 6．弃去上清，将细胞重悬于30ml的PBS液中（含1-5%的胎牛血清） 二．多形核白细胞的分离 1．使用10ml的