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- 2019-01-11 发布于福建
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镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化-内你科学专业毕业论文
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研究生签名:轩晶晶 导师签
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万方数据
目
目 录
中文摘要 l
英文摘要 4
英文缩写 8
研究论文镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化
—1L—JL
刖吾 9
材料与方法 11
结果 19
附图 21
附表 25
讨论 26
结论 29
参考文献 30
综述 镁在慢性肾脏病血管钙化中的作用 .32 致谢 41
个人简历 42
万方数据
中文摘要镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化
中文摘要
镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化
摘 要
目的:血管钙化是慢性肾脏病(CKD)患者的常见并发症,与心血 管疾病(CVD)死亡率密切相关。众所周知除传统危险因素,非传统因 素,如尿毒症毒素、矿物质代谢紊乱,尤其是高磷血症,在血管钙化的发 生发展中起着重要的作用。其中高磷可通过很多途径诱导血管平滑肌细胞 (VSMCs)发生钙化,如血管平滑肌细胞凋亡、骨源性分化、钙化促进 因子(如:核心结合因子0【.1)及抑制因子(如:基质G蛋白;骨桥蛋白质) 的平衡紊乱等。因此由于血管钙化发生的机制十分复杂,致使目前对血管 钙化尚无有效的预防和治疗方法。镁离子作为体内重要的阳离子对维持血 管弹性和心脏节律有重要的作用,因此近年来镁离子与血管钙化之间的关 系备受关注,有临床研究发现碳酸镁可能会抑制冠状动脉钙化的进展,但 镁离子和血管钙化之间的确切关系目前尚不完全明确,因此本研究旨在探 讨增加镁离子浓度后对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制。
方法:
1 VSMCs原代培养 取5周龄雄性健康SD大鼠胸主动脉通过组织贴壁法进行VSMCs原
代培养,应用形态学和免疫学方法进行平滑肌细胞鉴定。 2实验干预及分组 随机将VSMCs分为4组:(1)正常对照组:加入10%胎牛血清的低
糖DMEM培养基;(2)高磷组:正常培基中加入10 mmol/L B一甘油磷酸
(p.GP);(3)镁干预组:在高磷培基中加入3 mmol/L硫酸镁(MgS04); (4)镁通道抑制剂(2.APB)干预组:高磷培基中加入3 mmol/L MgS04 及10~mol/L 2-APB。各组VSMCs分别培养0、3、6、10、14天。
3在培养14天后测定各组VSMCs的钙化水平 各组VSMCs的钙化染色应用茜素红(Alizarin red stain)方法;各组
VSMCs钙含量测定应用邻甲酚酞络合酮比色法。 4在培养14天后测定各组VSMCs的碱性磷酸酶(ALP)活性 将各组VSMCs培养14天后弃去其上清液,依据ALP活性试剂盒测
万方数据
中文摘要
中文摘要 定ALP活性,此过程严格按照试剂盒说明书进行操作。
5在不同时间点测定各组VsMCs核心结合因子0【.1(Cbfal)mRNA
的表达
应用逆转录PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对 照组、高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组Cbfal mRNA 的表达。
6在不同时间点分别检测各组VSMCs中基质G蛋白(MGP)mRNA 和骨桥蛋白质(OPN)mRNA的表达。
应用RT-PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对照组、 高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组VSMCs MGP mRNA 和0PNmRNA的表达。
7统计学处理 应用SPSSl9.0软件进行数据统计学分析,实验数据应用均数±标准
差表示,多组问均数差异比较应用单因素方差分析(ANOVA),组间均数 两两比较应用SNK检验,P0.05认为差异有统计学意义。
结果: 1大鼠VSMCs的原代培养
大鼠原代VSMCs采用组织块贴壁法获得,一般情况下动脉组织块贴 壁后约3~4天即可爬出少量细胞,细胞形状主要为长梭形,并以束状形
式排列,组织块贴壁6—7天后细胞融合成片,细胞形状仍以梭形为主。当 细胞处于亚融合状态时即可传代,传代后的细胞开始为椭圆形或者圆形, 待细胞贴壁后可逐渐伸展为梭形,细胞浆丰富,细胞核呈圆形或者卵圆
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