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作为载体的必要条件 1.能自我复制 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达; 2.有一个至多个限制酶切位点 能与目的基因结合 3.有遗传标记基因 便于观察 4.对受体细胞无害、易分离 安全、比较容易得到 精讲精练系列 精讲精练系列 同学们: 不做与课堂教学无关的事,保持课堂良好纪律秩序。 听课时有问题,应先举手,经教师同意后,起立提问。 现在开始上课啦!!! 1.1DNA重组技术的基本工具 设想一 能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢? 胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来只能从猪、牛等动物的胰腺中提取,产量低成本高。 而微生物生长迅速,容易控制。于是科学家设想,若能将人的胰岛素基因导入微生物体内,并得以表达,就不仅能解决产量问题,还能大大降低生产成本,使药品价格大幅下降。 设想二 能否让微生物产生出人的 胰岛素等珍贵药物? 这些定向改造基因的设想能实现吗? 经过多年的努力,科学家终于在20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术 ——基因工程 基因工程的概念 基因工程:指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的概念 基因工程培育抗虫棉的简要过程: 抗虫棉的培育有哪些关键步骤? 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 普通棉花(无抗虫特性) 棉花细胞(含抗虫基因) 与运载体DNA拼接,导入 棉花植株(有抗虫特性) 表达 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具? 基因工程培育抗虫棉的关键步骤: 关键步骤一: 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二: 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三: 抗虫基因进入棉花细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具? “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 DNA 重组技术的基本工具 本节知识内容 §1-1 DNA重组技术的基本工具 专题一 基因工程 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是原核生物 4000种。 1、来源: 2、种类: 3、作用: 5、结果: 形成两种末端 一、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 4、切割方式: 错切和平切 A T G C A T G C 限制酶切割磷酸二酯键 限制性内切酶作用过程 1、大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开形成黏性末端。 2、SmaⅠ能识别CCCGGG序列,并在C和G之间切割形成平末端 。 常见的两种限制酶 SmaⅠ 平末端 平末端 EcoRⅠ 黏性末端 黏性末端 什么叫黏性末端? 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时,被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端? 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。 基因的针线:DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 A T G C A T G C 连接酶连接磷酸二酯键 DNA连接酶的作用过程: 二、分子缝合针——DNA连接酶 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 作用部位: 是磷酸二酯键(扶手) 不是氢键(梯子) DNA连接酶将两条DNA链连接起来的酶。 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 分类 作用 E.coli
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