前脑特异性过表达vglut1转都基因小鼠的构建及初步表型分析-生理学专业毕业论文.pdf.docxVIP

竺 竺 鱼 住 硕 士 学位 论文 答 辩委 员会 成 员 名 单 姓姓 名名 职 称称 单 位位 备 注注 孙孙心 德德 教 授授 华 东 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院院 主 席席 林林龙 年年 教 授授 华 东 师 范 大 学 脑 功 能 基 因 组 学 研 究 所所所 王王智 如如 副 教 授授 华 东 师 范 大 学 脑 功 能 基 因 组 学 研 究 所所所 孟孟 博博 工 程 师师 华 东 师 范 大 学 脑 功 能 基 因 组 学 研 究 所所 秘 书 华 华 东 师 范 人 学 硕 卜学 位 论 文 中 文 摘 要 前 脑 特 异 性 过 表 达 V G L U T I 转 基 因 小 鼠 的 构 建 及 初 步 表 型 分 析 摘 要 谷 氨 酸 是 中 枢 神 经 系 统 主 要 的 兴 奋 性 神 经 递 质 。近 些 年 ，研 究 人 员 应 用 分 子 生 物 学 技 术 成 功 地 从 哺 乳 类 动 物 克 隆 出 三 种 脑 内特 殊 的 N a+依 赖 的 囊 泡 膜 谷 氨 酸 转 运 体 (v esieu lar g lutam ate tran sp o rte rs，V o L u Ts ) ， 分 别 命 名 为 V o L U T I 、 v G L U TZ 和 V G L UT 3 。研 究 证 实 ，V G L U Ts 可 作 为 中枢 神 经 系 统 内谷 氨 酸 能 终 末 的 特 异 性 标 记物 ， 谷 氨 酸 的 量 子 释 放 要 依 赖 于 囊 泡 膜 上 V G L U Ts 的 数 量 。 那 么 ，遗 传 性 增 强 v G L U Ts 的 数 量 会 对 神 经 递 质 释 放 量 、 神 经 递 质 释 放 的 调 控 机 制 、 突 触 可 塑 性 及 学 习 与 记忆 等 大 脑 基 本 功 能 产 生 影 响 吗 ? 本 研 究 分 别 从 C 57 B L/6 小 鼠和 SP rague D aw ley 大 鼠 的 cD N A 文 库 中 克 隆 出 v G L u TI 的 cD N A ，将 v G L u TI 片 段 载 入 p 26 5 载 体 中 ，再 利 用 特 定 的 限 制 性 内 切 酶 ，将 p 2 65 一V G L U TI 片 段 连 接 到 p 2 79 载 体 上 ，利 用 p 2 7 9 载 体 上 前 脑 特 异 性 表 达 的 钙 离 子/钙 调 素 依 赖 性 蛋 白激 酶 ll a 亚 基 (简 称 a 一C aM K ll)为 启 动 子 ，成 功 构 建p 2 7 9一v G L u T I重 组 质 粒 。通 过 对 B 6/c B A F I小 鼠受 精 卵 进 行 原 核 显 微 注 射 ， 获 得 前 脑 特 异 性 过 表 达 V G L U TI 转 基 因 小 鼠 。 实 验 注 射 移 植 后 出 生 原 代 小 鼠共 89 只 ，经 p C R 和 S ou the rn b lottin g 检 测 得 到 V G L U T I阳 性 F o u n d er小 鼠 2 只 ; 用 透 射 电镜 观 察 到 转 基 因 小 鼠 的 海 马 中 突 触 前 膜 内囊 泡 丰 富 ， 大 量 集 聚 并 成 堆 分 布 ; 毛 细 管 电 泳 技 术 检 测 了 转 基 因 小 鼠 的 皮 层 、海 马 、丘 脑 、小 脑 内 各 单 胺 类 神 经 递 质 的 含 量 ，结 果 表 明 5一轻 色 胺 、多 巴胺 、 肾 上 腺 素 、去 甲 肾 上 腺 素 四 种 单 胺 类 神 经 递 质 在 各 脑 区 的 分 布 均 没 有 显 著 性 的 变 化 。 为 研 究 前 脑 特 异 性 过 表 达 V G L U TI 基 因 对 学 习 与 记 忆 及 情 绪 相 关 行 为 有 何 影 响 ， 我 们 将 转 基 因 小 鼠 和 同 窝 对 照 小 鼠 分 成 3 月 、 6 月 、 12 月 和 16 月 龄 各 个 年 龄 梯 度 ，利 用 开 场 运 动 、高 架 十 字 迷 宫 、新 异 物 体 探