紫外吸点收法测定蛋白质含量.pptVIP

紫外吸收法测定蛋白质含量 一、实验目的 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理； 熟练掌握紫外分光光度计测定原理及使用方法。 二、实验原理 由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系，可作定量测定。 三、 实验材料、主要仪器和试剂 1．试验材料：待测的蛋白质溶液。 2．? 主要仪器： （1）紫外分光光度计，（2）试管与试管架，（3）刻度吸量管 3．试剂： （1）标准牛血清蛋白溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。 （2）待测蛋白质溶液：浓度为1mg/mL左右的溶液 四、操作步骤 1．标准曲线制作 按下表分别向每支试管内加入各种试剂，混匀。以光程为1cm的石英比色杯，在280nm波长处测定各管溶液的光密度值OD280nm。 以蛋白质浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘出标准曲线。 2．样品测定 取待测蛋白质溶液1mL，加入蒸馏水3mL，混匀，按上述方法测定280nm的光密度，并从标准工作曲线上查出待测蛋白质溶液的浓度。 五、附注 1．在测定工作中，可以利用280nm及260 nm的光密度值求出蛋白质的浓度： 蛋白质浓度（mg/mL）=1.45OD280nm―0.74OD260nm 上式中的OD280nm是