基于16srdna与cfp10基因的qpcr技术在脊柱结核诊断中的初步应用-临床医学(外科学)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 基于16SrDNA与CFP10基因的qPCR技术在脊柱结核诊断 中的初步应用 论文作者签名: 指导教师签名: 论 文 评 阅 人 1 ： 评阅人 2： 评阅人 3： 答辩委员会主席： 委员 1： 委员 2： 委员 3： 委员 4： 委员 5： 委员 6： 答辩日期： 年 月 日 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包 含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的 学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论 文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读硕士学位期间在导师指导下完成的学位 论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的 名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分 内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省 有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全 文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相 关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文 全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解 密后适用该授权。 作者签名： 导师签名： 年 月 日 年 月 日 主要缩略词英文索引 英文缩写 英文全称 中文全称 MTB TB WHO PCR FQ-PCR CFP-10 Bp DNA CT Mycobacterium tuberculosis Tuberculosis World health organization Polymerase chain reaction Real-time fluorescent quantitative Cul-ture filtrate protein 10 Base pairs Deoxyribonucleic acid Threshold cycle 结核分枝杆菌 结核病 世界卫生组织 聚合酶链反应 实时荧光定量 PCR 培养滤液蛋白 10 碱基对 脱氧核糖核酸 循环阈值 基于16SrDNA与CFP10基因的qPCR技术在脊柱结核诊断中 的初步应用 研究生：朱毅杰 导 师：王麓山 副教授 摘要：目的 探讨及推广荧光定量PCR技术在脊柱结核诊断中的应用 方法 选择结核分枝杆菌 16SrDNA 和 CFP10 两个基因作为本次实验 的靶基因，分别设计两对特异性的引物，应用 SYBR Green I 法（荧 光染料法）建立荧光定量 PCR 反应体系，依据基因数据库中所提供的 两种基因的保守序列，利用人工化学合成法获得目的基因，构建重组 质粒体 pGH-16SrDNA 和 pGH-CFP10，并对重组质粒体进行酶切鉴定 和序列测定，成功构建阳性标准品，并制作出标准曲线及曲线方程， 最后用此方法对 20 例临床确诊为脊柱结核患者的血浆标本以及 20 例 非脊柱结核患者的血浆标本进行检测与定量。 结果 本次实验中所建立的荧光定量方法线性关系好，均呈线性 负相关。两个基因（16SrDNA和CFP10）的标准曲线的相关系数分别 达到0.999和0.998，实验中最低检测下限分别达到1.48×101copies/ul 和2.67×101copies/ul，而且特异性好，两条基因的溶解曲线均呈现单 一的峰值，没有出现非特异性扩增产物以及引物二聚体的干扰。在临 床上已确诊的20例脊柱结核患者的血浆MTB-DNA的检测结果提示二 者全部为阳性，20例非脊柱结核感染患者的血浆MTB-DNA检测结果 有19为阴性，1例提示为阳性，并且平均检测一份临床血浆标本的时 间仅为2小时。 I 结论 本实验成功建立了以16SrDNA和CFP10为靶基因的脊柱 结核荧光定量PCR检测体系，可以初步用于临床脊柱结核患者的结核 分枝杆菌病原体检测及定量。 关键词：结核分枝杆菌 DNA；脊柱结核；荧光定量 PCR；快速诊断； 16SrDNA；CFP10 II 16SrDNA and CFP10 gene fluorescence quantitative PCR application in the diagnosis of spinal tuberculosis Postgraduate: Yi-jie Zhu (Spinal surgery) Directed by