蚯蚓纤维蛋白溶解酶的二提取分离纯化.pptVIP

蚯蚓纤维蛋白溶解酶的提取分离纯化 生物062 第二组 酶的粗提液是否只有酶，有没有其它物质？ 除含有所需要的酶外，还含有其他蛋白质，以及其他大分子和小分子化合物杂质。因此需要根据提取酶与杂质的性质差别进行分离纯化。 如何将酶从粗提液中分离纯化？ 要在许多蛋白质的混合物中分离出所需要的酶蛋白，目前常用的方法有盐析法（利用不同蛋白质在不同盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离），柱层析法，薄膜超滤法，亲和层析法，电泳法等。在大体积的提取液中一般先采用硫酸铵分级盐析沉淀。盐析法是提纯酶使用最早的方法之一，迄今仍广泛使用，而且在高浓度的盐溶液中酶蛋白不易变性而失去活性，利于工作在室温中进行。不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度有不同程度的降低，盐析法就是利用这一性质，将不同性质的蛋白质分离，选择合适饱和度的硫酸铵，使沉淀的蛋白质的酶活性最大。 蚯蚓纤维蛋白溶解酶的提取 将蚯蚓放在水组织捣碎机捣碎匀浆, 放入离心机进行离心, 取出上清液, 加人丙酮产生沉淀, 再加人乙醚脱水, 即得粗品。 纤溶酶活检测方法 采用