基因转染结合特异性ctl细胞对肝癌的免疫基因治疗研究-外科学专业论文.docxVIP

英文缩写词表Table 英文缩写词表 Table ofEnglish Abbreviation 英文缩写 英文全称 中文全称 HCC Hepatocellular carcinoma 原发性肝癌 Major Histocompatibility MHC 主要组织相容复合物 Complex IL。2 【nterleukin．2 白细胞介索．2 specific Cytotoxic T 特异性细胞毒 sCTL Lymphocyte T淋巴细胞 淋巴因子激活的 LAK Lymphokine Activate Cell 杀伤细胞 NK Nature Killer Cells 自然杀伤细胞 SPF Specific Pathogen Free 无特定病原 American Type Culture 美国典型培养物 ATCC Collection 收集部 Enzyme—Linked ELISA 酶联免疫吸附测定 Immunosorbent Assay APC Antigen Presenting Cell 抗原呈递细胞 TCR T Cell Antigen Receptor T细胞抗原受体 基因转染结合特异性CTL细胞 基因转染结合特异性CTL细胞 对肝癌的免疫基因治疗研究 中山大学附属第一医院特诊中心外科 外科学硕士研究生 左继东 指导老师 叶小鸣副教授 中文摘要 背景 原发性肝癌在我国是常见的恶性肿瘤之一。肝癌治疗模式已发展成为包括 手术切除、介入治疗、化疗、免疫基因治疗、热疗及肝移植等的综合治疗模式。 手术切除是目前最为有效的治疗手段，但仍有相当高的复发率。随着现代免疫 学和基因工程技术的迅猛发展，肿瘤免疫基因治疗这门新兴领域正在兴成。肝 癌在免疫基因治疗方面亦取得了较大的发展。肝癌的基因治疗有细胞因子基因 治疗、药物基因治疗及抗血管生成基因治疗等多种方法。本研究联合使用白细 胞介素．2(IL．2)基因转染和特异性细胞毒性T淋巴细胞(sCTL)治疗肝癌， 在肝癌的免疫基因治疗方面进行了新的探索。 目 的 通过研究白细胞介素．2(IL．2)基因转染联合特异性细胞毒T淋巴细胞 (sCTL)对人肝癌细胞(HepG2)的体外杀伤试验和动物实验，探讨肝癌免疫 基因治疗的新途径。 方法 1．体外实验： 采用多聚阳离子脂质体LipoGen作载体，在不同的脂质体与pORF．hIL一2 采用多聚阳离子脂质体LipoGen作载体，在不同的脂质体与pORF．hIL一2 质粒比例下，将IL．2基因转染至HepG2细胞，通过检测培养液上清IL．2浓 度变化，观察、比较在不同比例情况下的转染效率，以及转染后IL．2持续分 泌的时间。用MTT法检测单用sCTL和IL．2基因转染联合sCTL对HepG2 细胞的杀伤效应。 2．动物实验： 建立皮下荷瘤裸小鼠肝癌模型。[1】取上述荷瘤裸小鼠6只，均分成两组： pORF—hlL一2实验组和空白对照组，分别检测不同时间裸小鼠体内血浆hIL．2 浓度。【2】取上述荷瘤裸小鼠24只，均分成四组：IL一2治疗组、sCTL治疗 组，以及2者联合应用治疗组和空白对照组。分别行皮下移植肝癌瘤内注射 药物，分别观察各组荷肝癌裸小鼠肿瘤体积变化及生存时间。 结果 1．体外转染实验 在体外转染实验中．脂质体LipoGen：pORF—hIL一2质粒为5：l时，Hep02 细胞的IL一2分泌水平最高，结果具有非常显著性差异(P0．01)，确定体外最 佳转染比例为5：1。分泌时间检测发现HepG2可连续分泌IL．2约30天，高峰 在第2～3天，l周左右明显下降。MTT比色法检测单用sCTL和IL．2基因转 染及sCTL联合使用在体外对HepG2细胞的杀伤效应，联合应用组杀伤效应明 显高于单用sCTL组，两组结果具有非常显著性差异fP0．01 2．动物试验 在动物实验中；[1】poRF-hIL一2实验组经注入5：l的脂质体和pORF．hIL．2 后，实验小鼠体内从转染后第一天始即可检出IL．2，且浓度逐渐升高，第3 天浓度达到高峰(t35．3pg／m1)。[2]4组皮下荷肝癌裸小鼠经不同方案治疗后，比 较肿瘤体积及荷肝癌裸小鼠生存时间，sCTL组显示有抑制肝癌生长的作用(与 空白组对比，p0．01)，联合治疗组显示极强的抑制肝癌生长的作用，并有l 例裸小鼠出现肿瘤完全消退，与其它3组相比，结果均有非常显著差异(P 0．01)。 2 结论多聚阳离子脂质体LipoGen转染基因效果满意，转染后IL．2分泌浓度高， 结论 多聚阳离子脂质体LipoGen转染基因效果满意，转染后IL．2分泌浓度高， 分泌时间长达30天，可以有效的维持sCTL细胞的活力。单独使用sCTL对体 外HepG2细胞和裸小鼠移植瘤均有一定的杀伤作用；IL．2基因转染和sCT