高效液相色谱法测定人体血浆中茶碱、多索茶碱的浓度..pptVIP

“ ” “ ” HPLC法测定人体血浆中茶碱、多索茶碱的浓度 临床药学 主要内容 1.研究背景 2.实验操作 3.结果分析 4.讨论 研究背景 茶碱(theophylline)和多索茶碱(doxofylline)均属于黄嘌呤的衍生物，常用于支气管哮喘和喘息性支气管炎缓解期的治疗。 茶碱的最佳治疗窗的血药浓度在10-20 μg/ml，血药浓度过大时，不良反应发生率明显上升。 多索茶碱相比茶碱作用较强，起效快，作用时间长，安全性较高。 研究背景 高效液相色谱(HPLC)以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 实验操作 仪器和试剂 高效液相色谱仪 戴安P680 电子天平 AUW 120D 高速离心机 TGL-16 液体快速混合器 YKH-II 茶碱、多索茶碱对照品 中国食品药品检定研究院 实验操作 色谱条件 色谱柱：Waters-C18柱(4.6mm×150mm，5μm) 检测波长：274 nm 流动相：甲醇:水=30:70 流速：1.0 ml/min 柱温：40 ℃ 进样量：20 μl 实验操作 血浆样品处理 取血浆样品200 ?L于1.5 mL离心管中，加入600 ?L甲醇，旋涡2 min，于12000 r·min-1高速离心10 min，吸取上清液至自动进样器样品瓶中，进样20?L，进行HPLC分析。 实验操作 专属性试验 取不同个体的空白血浆按上述血浆样品处理方法处理后，进样分析，结果表明血浆内源性物质对样品测定无干扰。 实验操作 空白血浆和加样血浆的色谱图 实验操作 线性试验 分别精密加入系列的茶碱和多索茶碱对照品贮备液于1.5 ml离心管，以氮气流吹干后加入空白血浆200 μL，旋涡混匀，配成含茶碱和多索茶碱的浓度分别为2.0、5.0、10.0、25.0、40.0、50.0μg·mL-1的标准含药血浆，按上述血浆样品处理方法处理，制备一条标准曲线，结果表明，血浆中两者在2.0~ 50.0 μg·mL-1范围内线性关系良好。 实验操作 精密度和准确度试验 分别精密制备含茶碱和多索茶碱的低、中、高三个浓度的质控血样，按上述血浆样品处理方法处理后进样。1d内测定5次，计算得各浓度血样茶碱和多索茶碱的日内RSD均小于2%。同法制备上述三个浓度的血样，连续测定3天，求得两者的日间RSD均小于3%。准确度试验表明计算值与理论值的RE%均小于5%。 实验操作 提取回收率试验 同上分别精密制备含茶碱和多索茶碱的低、中、高三个浓度的质控血样，每个浓度各6份，处理后进样。以测定浓度与未经提取的相应浓度对照品溶液的峰面积比值计算得平均提取回收率，结果表明三个浓度血样中的茶碱和多索茶碱的提取回收率均大于90%。 实验操作 稳定性试验 同上制备低、中、高浓度的质控血样，按血浆处理方法处理后，于0、8、24 h 测定，茶碱和多索茶碱的RSD 分别为 4.16％、2.24％、1.97％和 3.13％、1.26％、1.81％，表明样品提取后在24h内稳定。 同上制备低、中、高浓度的质控血样，0h即时测定；-40℃冷冻保存24h后，于室温条件下解冻后测定，反复冻融3次，结果表明两者的 RSD 分别为 2.15％、3.44％、1.27％和 5.51％、2.38％、2.24％，表明样品经过冻融后的稳定性良好。 结果分析 经过方法学验证，本试验建立的HPLC法能够满足简便灵敏准确地同时测定茶碱和多索茶碱在人体血浆中的浓度。该法可应用于两者常规的治疗药物浓度监测，保证临床用药安全、有效。 讨论 流动相的优化 蛋白沉淀剂的选择 茶碱的药动学 谢谢！ “ ” “ ”