第1节-高效液相色谱的特点和仪器.ppt

第三章高效液相色谱分析 一、高效液相色谱仪 HPLC 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC 一、高效液相色谱法的特点 二、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 液相色谱仪（5） 三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 2.主要部件 (2) 梯度淋洗装置 洗脱方式 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 类似GC的等温度洗脱 2）梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类 和比例 即不断改变其极性（两个泵） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品） (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 示差折光检测器 d. 荧光检测器（fluorescence detector） 请选择内容 * * 第一节高效液相色谱的特点与仪器 high performance liquid chromatograph feature and instrument of HPLC 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 1.流程 1．贮液罐（滤棒，可滤 去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线性范围宽； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种； 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； * *