基因介导的人松弛素改善压力负荷大鼠舒张功能及相关机制的研究-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 万方数据 万方数据 前言 射血分数代偿的心力衰竭（HFpEF）约占全部心衰患者的 50%，其主要病因 为高血压 1,2。它的预后与射血分数下降的心力衰竭（HFrEF）相似或仅仅稍好于 HFrEF。许多对 HFrEF 有效的药物对于 HFpEF 未显示出改善效果 3,4。因此急需一 种新型有效的治疗方法来改善 HFpEF 的预后。 松弛素（RLN）是一种机体产生的多肽，在早期被当做一种生殖激素，它可 以帮助女性在妊娠期产生一系列适应性变化，包括松弛耻骨韧带、软化宫颈等促 进分娩作用和促进血管扩张、增加肾血流量等心血管系统适应性改变 5。不仅在 妊娠期妇女体内发现 RLN 的表达，在男性和非妊娠期妇女体内器官组织中也有它 的存在。近年来，还发现了它其他多种生物学效应，包括产生一氧化氮 6，抑制 内皮素 7,8，抑制血管紧张素酶 II9,10，表达血管生成因子 VEGF11 和抗纤维化 12。鉴 于以上作用，有研究者将 RLN 应用于急性心衰的治疗中，在 Pre-RELAX-AHF13 和 RELAX-AHF14 两个临床实验中，发现静脉应用人类重组松弛素可以改善急性心衰 患者呼吸困难症状并降低 180 天死亡率，亚组分析显示：HFpEF 和 HFrEF 同样 获益，松弛素如何改善 HFpEF 患者的舒张功能及其相关机制并不清楚。 HFpEF 的主要表现是舒张功能不全。细胞内 Ca2+ 是调节心脏舒张的重要因 素，主要机制为舒张期肌浆网钙调 ATP 酶（SERCA2）摄取细胞质的 Ca2+并贮存在 肌浆网内，使胞浆 Ca2+浓度迅速降低，Ca2+与肌钙蛋白解离，心肌舒张，这一过 程主要是由受磷蛋白（PLB）调节 SERCA2 实现的。已发现磷酸化的 PLB 可以增强 SERCA2 的活性，改善心脏的舒张功能，而去磷酸化的 PLB 抑制 SERCA2 的活性， 损害心脏的舒张功能 15。因此我们推测增加 PLB 的磷酸化水平可能是治疗 HFpEF 的有效途径。 Akt 是心脏中最重要的激酶之一，是细胞外刺激和细胞内信号通路的重要连 接点 16。松弛素能够激活 Akt，激活的 Akt 可以使 PLB 磷酸化 17。激活的 Akt 能 诱导心肌细胞肥大 18，但是靶向激活核内 Akt 发现有心肌细胞保护作用，可能是 治疗 HFpEF 的方法。 因此，本实验的主要目的是观察松弛素是否可以改善压力负荷大鼠模型的舒 张功能。为增加心脏松弛素水平，我们使用心肌注射方法将过表达人类 RLN-2 1 腺病毒载体直接注入心脏。我们进一步探索相关机制：松弛素激活核内 Akt，使 PLB 的磷酸化水平增加，进而增加 SERCA2 活性而改善舒张功能。 2 摘要 背景-松弛素（RLN）是一种具有心血管作用的肽类激素，已在急性心衰临床试验 中证明了它的安全性和有效性，然而是否可以改善射血分数代偿的心力衰竭 （HFpEF）患者的舒张功能还未曾可知。本实验为研究松弛素是否改善压力负荷 大鼠模型的舒张功能及相关机制。 方法-构 建 带 有 GFP 的 腺 病 毒 空 载 体 (Ad-GFP) 和 表 达 RLN 的 腺 病 毒 载 体 (Ad-GFP-RLN2)。应用腹主动脉缩窄方法建立压力负荷大鼠模型。4 周后，将模 型随机分为三组（n=10），模型组（TAC）、腺病毒空载体组（TAC+GFP）、过表 达 RLN2 腺病毒载体组（TAC+RLN2），采用直接心肌注射引入质粒。12 天后，采 用心脏超声和血流动力学检测各组的舒张功能。同时取大鼠心肌组织进行检测， 包括 Western blot 检测 Akt、受磷蛋白（PLB）磷酸化水平和定磷法测定 SERCA2 活性等。 结果-相对于 TAC 和 TAC+GFP 组，TAC+RLN2 组的二尖瓣舒张早期最大速率（E）/ 二尖瓣舒张晚期期最大速率（A）比值显著升高(1.86±0.26 vs 1.54±0.32 和 1.52±0.21,均有 p0.05 )，等容舒张时间（IVRT）减少(37.78±5.80 ms vs 47.01 ±7.07 ms 和 45.85±7.44 ms,均有 p0.05)，左室压力最大下降速率（dP/dtmin） 降低(-5956±1104 vs -4864±1171 和 -4583±1123,均有 p0.05)，左室心肌 松 弛 时 间 常 数 （ Tau ） 减 少 (17.4 ± 2.4 vs 26.1 ± 2.7 和 24.8 ± 3.1, 均 有 p0.05)，二尖瓣环舒张早期最大速率（e’）/二尖瓣环舒张晚期期最大速率(a’) 接近正常（1.20±0.49 vs 0.4±0.43 和 0.46±0.37,均