基因打靶转基因桑蚕载体的构建及杆状病毒几丁质酶基因（chia）和半胱氨酸蛋白酶基因（cp）失活表达gil-3的研究-特种经济动物饲养专业论文.docxVIP

基崮打靶转基因桑蚕载体的构建及杆状病毒几丁质酶基因和半胱薹【醴蛋白酶摹囡火活表达GIL一3的研究提要 基崮打靶转基因桑蚕载体的构建及杆状病毒几丁质酶基因和半胱薹【醴蛋白酶摹囡火活表达GIL一3的研究 提要 ．P绷IDD6 ／随着经济和科技的发展，以桑蚕作为生物反应器牛产有用蛋白为古老的蚕丝 ＼ 业注入了新的活力。桑蚕生物反映器主要有两种形式：杆状病毒表达载体系统 (Bacuiovirus Expression Vector System，BEVS)和转基因桑蚕(transgenic silkworm)。1“ 一， 我们克隆了家蚕核型多角体病毒苏州株的IE．1启动予的全序列和桑蚕丝素 蛋白基因轻链第五外显子到第七外显子之间的1．2kb和O．5kb的片段作为侧翼序 列，将置于IE．1启动子之下的绿色荧光蛋白基因(GFP)插入其中，期待经过 基因打靶可以得到单拷贝的转基因桑蚕。 本文用含多角体蛋白基因的重组杆状病毒转移载体pSKC—P—C与能表达白 介素-3(IL．3)的重组杆状病毒BmNGIL一3在桑蚕细胞中进行共转染，通过同 源重组、经两轮空斑纯化，获得了几丁质酶基因(ChiA)和半胱氨酸蛋白酶基 凶((P)失活、可形成多角体的、并表达lL．3的重组杆状病毒NdBmNGIL一3。 NdBmNGlL．3感染细胞的存活时间比普通病毒长，推测ChiA、CP二基因的失 活可延长外源基因的表达水平。 关键词：转基因， 桑蚕 ．生物反应器． 白介素3． 杆状病毒， √ V I， V v 基因袭述 作 者：马志明 指导教师：何毅 贡成良 萆圜打靶转基因桑蚕载体的桕建及杆状舾毒儿丁质酶基因和、}胱氟醴蚩白酶基崮火活表达GII。一3的研究Construction 萆圜打靶转基因桑蚕载体的桕建及杆状舾毒儿丁质酶基因和、}胱氟醴蚩白酶基崮火活表达GII。一3的研究 Construction of targeting transgenic vector for silkworm and study on inactivity ChiA and CP of baculovirus to express GIL一3 ABSTRACT With the growth of economic and technology,it’S possible to use the silkworm as a bid—reactor for production of heterologous protein．There are n’O main ways to produce interesting protein by silkwrom，the baculo、irus expression vector system(BEVS)and transgenic silkworm． We eoloned BmNPVsu IE一1 promoter,1．2kb and O．5kb gene of fibroin light chain from the 5‘“exon to the 1”exon to construct the transgenic silk、’orm vector．By means of insert report gene GFP which is downstream of IE一1 promoter in the fibroin gene、、e have coloned．it’S possible to get the single copy gene of trasgenic silkwormⅥhich will spin silk and express the gene continuall)． We construct the vector pSKC-·P-·C which has Polh gene between ChiA and (p The vector was infected Bran cells with BmNGIL．3 SO that the ChiA and CP are out of function。The recombinant virus NdBmNGIL一3 n7e gained has shoal’ed that the expression time of GIL一3Ⅵas prolonged and the polh and GIL一3 n as detected in BmN cells，accordingly，recombinant virus could be infected silkworm bv eaten． Ke3’words：interleukin-3(IL一3) baculos7irus