血清α-淀粉酶入活性的测定迈克.pptVIP

血清α-淀粉酶（AMS或AMY）活性的测定Reagent for α- Amylase Test 一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、注意事项 六、方法学评价 一、原理： 样品中α-淀粉酶（1，4-α-D-葡萄糖水解酶，又称淀粉内切酶，对1，4-糖苷键连接的葡萄糖有特异性。）催化淀粉分子及糖原中的α-1，4葡萄糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1，6糖苷键支链的糊精，在淀粉（已知浓度）充分的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其颜色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而推算出淀粉酶的活力。 注：1、生物界存在α和β两种淀粉酶，但人体内仅有α-淀粉酶。 2、淀粉酶分子量40000 ~ 50000,很易由肾排出。 二、测定步骤： 各管混匀， 660nm波长，以蒸馏水调零，测定各管吸光度值。 2、计算： 注：淀粉浓度 0.4g/L 样品AMY活力（苏氏单位）= 样品AMY活力（苏氏单位)= 注解 ①0.4——淀粉浓度 ②5.0—— 1单位定义消耗淀粉mg数 ③15 —— 1单位定义反应时间 ④7.5 —— 酶的实际作用时间 ⑤100—— 1单位定义用血清 ⑥0.02—— 样品取量 3、AMY活性单位定义： 100ml血清中的淀粉酶在37℃，15分钟水解5mg淀粉为1个单位。 4、半自动生化仪的使用 ①测定法：终点法 ②温 度：37℃ ③波 长：623nm ④吸 量：1000 μl ⑤参考范围：60~180U ⑥线性范围：0~400U 三、参考值： 血清：60~180U苏氏单位 尿液：100 ~ 1200U苏氏单位 四、临床意义： 淀粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌，肺、肝、甲状腺、脂肪等组织亦含有此酶。血清淀粉酶测定主要用于急性胰腺炎的诊断。一般于发病后6~12h开始升高，12~24h达峰值，2~5d恢复正常，因此血清淀粉酶活性显著升高对急性胰腺炎的早期诊断价值较大。淀粉酶可通过肾小球滤过，尿淀粉酶于发病后12~24h开始升高，持续时间长，下降比血清淀粉酶慢，故胰腺炎后期测尿淀粉酶更有价值。 慢性胰腺炎、胰腺癌、急性阑尾炎、溃疡性穿孔、肠梗阻、流行性腮腺炎、唾液腺化脓等血清淀粉酶均可升高。肾功能障碍时，血清淀粉酶升高，尿淀粉酶降低。各种肝病患者，血、尿淀粉酶同时降低。 五、注意事项： 1、样品为不溶血的血清、血浆或尿液（pH值应调至7.0）样品应在低温条件下运输保存，血清或血浆中淀粉酶2~8℃可稳定30天，室温可稳定7天。 2、如果样品中AMY活力大于400苏氏单位或测定管吸光度小于空白管吸光度一半时，应将样品稀释后再进行测定，测定结果乘以稀释倍数。 3、加入显色剂及蒸馏水后，应立即比色，否则可致结果偏高。使用血浆时应选用肝素抗凝。 4、如遇黄疸、溶血或乳糜标本时应作样品空白。 六、方法学评价 1.淀粉遇碘呈蓝色反应属有机化学的经典型反应，方法可靠，反应特异性高。 2.线性范围：0~400苏式单位（U/L） 3.精密度：批内CN≤10% 4.准确度：不准确度≤20% 5.空白吸光度：空白管在660nm波长处，10mm光径，吸光度≥0.45 * * 试剂 R2（ml） 1.00 1.00 蒸馏水 （ml） 5.00 5.00 各管混匀，置37度水浴7.5分钟。 样 品 （ml） 0.02 — 蒸馏水 （ml） — 0.02 试剂 R1（ml） 1.00 1.00 试 剂 测定（U） 空白（B）