基因工程的基分本工具.pptVIP

基因工程的基本工具 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 3.“分子运输车”——载体 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的_________断开，因此具有____________。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： __________________________________ 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E?coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合____________。 ②区别：E?coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的____末端之间的磷酸二酯键连接起来； 而T4DNA连接酶能缝合_____末端，但连接平末端的之间的效率较______。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是_______,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链________分子。 （3）其它载体：___________________ (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 第二步：基因表达载体的构建 第三步：将目的基因导入受体细胞 第四步：目的基因的检测和鉴定 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指： __________的结构基因 原核基因采取_______获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有_______法和_________法。 第二步：基因表达载体的构建 组成：复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因 * 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在____分子水平上进行设计和施工的，又叫做________________ DNA DNA重组技术。 磷酸二酯键 专一性 黏性末端和平末端。 磷酸二酯键 黏性 低 黏性和平 质粒 环状DNA 噬菌体的衍生物、动植物病毒 编码蛋白质 直接分离 反转录 化学合成 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________ 前提条件 _______________、 ___________ 、 _________________________________. ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 *