猪肺炎支原体P46基因的原核表达与.PDFVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３３ ４３１４３７ 　 － ＡｃｔａＶｅｔｅｒｉｎａｒｉａｅｔＺｏｏｔｅｃｈｎｉｃａＳｉｎｉｃａ 　 　 　 　 猪肺炎支原体 基因的原核表达 与 Ｐ４６ 间接 ＥＬＩＳＡ方法 的建 立 ， １ ２ ２ ２ ２ ２ １ ２ ＊ ＊ ， ， ， ， ， ， ， 沈青春 王 芳 韩明远 覃青松 范学政 杨 汉春 宁宜宝 　 （ ， ； ， ） 中国农业大学 农业 部 人 畜共 患病 重 点 开放 实 验 室 北京 中国兽医 药 品监 察所 北京 １． １００１９３ ２． １０００８１ ： ， ， 摘 要 猪肺 炎 支 原 体 是猪 喘气 病 的病 原 体 本 研 究 选 择 猪 肺 炎 支 原 体 Ｐ４６膜 蛋 白基 因 亲 水 区 序 列进 行 克 隆 并 　 ， （ ） ， （ ） 将 其 内 个 编码 的 突变成 然后 再 克 隆到 载体 中 在 大肠 杆菌 细胞 内实 现 ３ Ｔｒ ＴＧＡ ＴＧＧ ＥＴ２８ａ ＋ ＢＬ２１ ＤＥ３ ｐ ｐ ， ， ， ， 了高效表 达 表 达 产物 相 对 分 子 质 量 约 为 ３１ｋｕ 约 占菌 体 总 蛋 白 ３５％ 表 达 形 式 为 包 涵 体 通 过 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎ 　 ｇ 证 明表 达 产物与猪 肺 炎 支 原 体 高免 血 清具 有 很 好 的反应 原 性 和 特 异 性 。将 大 肠 杆 菌 表 达 的 猪肺 炎 支 原 体 Ｐ４６重 、 ， ， 组 蛋 白经过 洗 涤 过 柱 纯 化后 作 为 间接 ＥＬＩＳＡ包 被 抗 原 用 于 检 测 猪 血 清 中猪 肺 炎 支 原 体 抗 体 通 过 对 各 参 数 和 ， ， ， 试 剂 的优 化 建立 了 ｒＰ４６ＥＬＩＳＡ方 法 获得 了较好 的效果 通过与 现有 ＥＬＩＳＡ检测 方 法 的 比较 结 果 表 明二 者 间具 － 有 较 高的符 合率 。 ： ； ； ； 关键词 猪肺 炎 支 原