蛋白质和工氨基酸.ppt

第一章 蛋白质的化学 概 述 第一节 蛋白质的化学组成 一.蛋白质的元素组成 主要的： C H O N S 50~55% 6~8% 20~23% 15~18% 0~4% 微量的： P Fe Cu Zn Mo I Se 大多数蛋白质含氮量较恒定，平均16 %，即1g氮相当于6.25g蛋白质。 6.25称为蛋白质系数。 样品中蛋白质含量 = 样品中的含氮量×6.25 第二节 蛋白质的基本单位 ——氨基酸 一.氨基酸的结构通式 二.氨基酸的分类 1.常见的蛋白质氨基酸（20种）（教程p.7) (1)按极性分：非极性氨基酸, 极性氨基酸 (2)按酸碱性分：中性氨基酸, 酸性氨基酸, 碱性氨基酸 (3)按营养状况分：必需氨基酸, 非必需氨基酸 2.稀有的蛋白质氨基酸 3.非蛋白质氨基酸 1.一般理化性质 晶形 熔点 味道 溶解度 吸收光谱 旋光性 2.氨基酸的两性性质及等电点 （1）两性性质 氨基酸的等电点（PI）的推导 3.氨基酸的化学反应 （1）茚三酮反应 AA +水合茚三酮 蓝紫色化合物 在弱酸中与氨基酸共热，具有游离氨基的氨基酸都生成紫色化合物（λ470) 脯氨酸是一个亚氨基酸，同其生成黄色化合物（ λ440）。 产生的颜色强度，与氨基酸浓度成正比。 2、肽的命名 3、肽的理化性质 在晶体或溶液中以两性离子状态存在 熔点高 其酸碱性决定于N端氨基、C端羧基和侧链R基 双缩脲反应 与氨基酸类似的反应：DNFB DNS PITC 反应等 4、常见的多肽（天然活性肽） 第四节 蛋白质的性质与化学技术纯化 1、胶体性质 1）.分子量很大 2).很大的吸附力 3).不能透过半透膜 4).其水溶液是亲水胶体 2、两性性质及等电点 3、沉淀反应 1).中性盐沉淀（盐析） 2).有机溶剂沉淀 3).生物碱沉淀 4).加热沉淀 4、变性作用 概念 影响因素 特征 复性 5、水解反应（完全水解/不完全水解） 6、颜色反应 双缩脲反应 酚试剂反应 茚三酮反应 二.分离纯化 1、一般程序 前处理 生物组织 破碎 溶解 离心 无细胞提取液 粗分级 盐析 等电点沉淀 超滤 有机溶剂分级 浓缩的蛋白质溶液 细分级 层析 电泳 精制品 结晶/冻干粉 2.分离纯化的方法和原理 1）根据分子大小进行分离 透析和超滤 离心沉降（沉降平衡/速率沉降） 凝胶过滤（凝胶层析） 2）根据溶解度差异分离 等电点沉淀 盐析 低温有机溶剂沉淀 3）根据电离性质不同分离 电泳 离子交换层析 4）根据生化性质分离 亲和层析 凝胶过滤层析原理 Cationexchangecolumn Gel filtrationcolumn Affinitychromatography 蛋白质的一级结构就是它的氨基酸序列 氨基酸序列是联系DNA中遗传信息与作为蛋白质生物功能基础的三维结构之间的桥梁。 1、氨基酸在蛋白质多肽链中的连接方式 ---- 肽键 二硫键（-s-s-) 2、蛋白质被水解成肽段后再测序 可以揭示进化关系 Edman （苯异硫氰酸酯法） 氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 1.蛋白质的二级结构 1)α- 螺旋 2)β-折迭 3)β-转角（U形转折/回折) 4)自由回转 蛋白质的α- 螺旋 蛋白质的β-折迭 第七节 蛋白质结构与功能的关系 一 、一级结构与功能的关系 1.一级结构反应种属特异性和亲缘关系 2.一级结构的变化造成功能的变化 3.肽链的局部断裂使蛋白前体激活 二、构象与功能的关系 构象的改变造成功能的改变 （如酶、血红蛋白等） 蛋白质的一级结构的变异与分子病 氨基酸顺序 1 2 3 4 5