食品中细菌检锁验技术基础.ppt

细菌接种法 平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： ★分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本 液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 连续划线法 细菌培养法 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：37℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 细菌在液体培养基中的生长现象 混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌 细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 菌 落 菌落与菌苔 细菌在液体培养基中的生长现象 细菌在半固体培养基中的生长现象 有动力 现象 无动力 现象 第二节 食品中细菌检验技术基础 一、细菌的形态学观察 二、细菌的分离与培养技术 三、细菌的生化反应 食品卫生细菌常规检验项目 卫生指标菌 大肠菌群测定 菌落总数测定 沙门氏菌检验 志贺氏菌检验 金黄色葡萄球菌检验 溶血性链球菌检验 致病菌 1、细菌的显微镜检查 显微镜：光学显微镜 放大倍数：10×100＝1000 镜头：油镜头 镜油：香柏油或石蜡油 香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近 显微镜使用完毕须擦拭镜头。 一、细菌形态学检查 （1）不染色标本检查 应用：主要用于观察活菌的动力和形态 常用方法：压滴法、悬滴法 载玻片 细菌悬液 盖玻片 ①压滴法 接种环取细菌菌悬液2～3环 镊子取盖玻片覆盖于菌液上 载玻片中央 注意：使盖玻片先接触菌液，缓慢放下，避 免产生气泡 镜检 ②悬滴法 取一凹玻片，在凹窝周围涂凡士林 盖玻片中央放1环菌液 凹玻片倒置于盖玻片，凹窝到准盖玻片中央菌液 反转盖玻片，轻压，使其与凹窝边缘黏紧 有鞭毛的菌，可看到其移动 （2）染色标本的检查 染色方法的种类 单染法:采用一种染料染色 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 染色标本检查的基本程序 涂片－→干燥－→固定－→染色 ★涂片方式：菌液、菌苔 ★干燥的方法：自然干燥、外焰烘干 ★固定的方法、目的 ★染料种类：碱性染料、酸性染料、中性染料，碱性染料最常用 复染法基本程序 初染－→媒染－→脱色－→复染 革兰染色法（Gram染色） 染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液、95％乙醇、稀释复红 染色方法： 结晶紫 初染 卢戈碘液 媒染 95％乙醇 脱色 稀释复红 复染 1分钟 30S～1min 1分钟 影响革兰染色的关键步骤是脱色 革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌 革兰阴性菌 革兰阳性菌 革兰染色意义 ★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性 影响革兰染色的因素 操作因素 ★ 涂片的厚薄 ★ 脱色时间的长短 染液因素 ★ 卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★ 结晶紫与草酸铵混合时间太长 细菌因素 ★ 细菌种类 ★ 细菌菌龄 抗酸染色 用于区别抗酸菌与非抗酸菌 细菌特殊染色 白喉杆菌异染粒 伤寒杆菌 负染色法 肺炎链球菌荚膜负染色 2、微生物直接计数 仪器：血细胞计数板 菌种：酿酒酵母 原理：利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，常用的微生物计数法。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。 优点：直观、快速。 缺点：计得的是活菌体和死菌体的总和，又称为总菌计数法。 每个大方格中的小方格数相同，即16×25=400小方格 每个计数室选5个（或4个）中格中的菌体进行计数。 1mL菌液的菌数=每小格内菌数×4×106×稀释倍数 （一）培养基 常用玻璃器材的准备 培养基的成分和作用 培养基的种类 培养基的制备 二、细菌的培养与分离技术 常用玻璃器材的准备 玻璃器材的种类及用途