食品中致病性大肠埃希整氏菌及检验.ppt

第三节 致病性大肠埃希氏菌及其检验 大肠埃希氏菌,俗称大肠杆菌,是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员,每克粪便中约含109个.大肠埃希氏菌随粪便排出后,广泛分布于自然界.水、牛乳及其他食品一旦检出大肠埃希氏菌，即意味着这些物品直接或间接被粪便污染。 正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和维生素K,生产大肠菌素，对机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分为三大类，1、产毒素型大肠埃希氏菌(ETEC)，2、侵袭型大肠埃希氏菌(EIEC)3、肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC)近来又提出另外两类4、出血性大肠埃希氏菌(EHEC) 5、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC) 致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能产生耐热(ST)和不耐热(LT)肠毒素的两种菌株均可引起人的食物中毒。引起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动物性食品，如乳与乳制品、肉类、水产品等，牛和猪是传播这种病菌、引起中毒的主要原因。 1996年7月在日本就发生了大肠杆菌0157型引起的食物中毒，造成9017多人中毒，10人死亡，其原因与生食萝卜苗有关，其中92例并发出血性肠炎及出血性尿毒症。2001年，再江苏、安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌0157:H7食物中毒，造成177人死亡，中毒人数超过2万人。 如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻和败血症等均可由大肠杆菌引起。 一、埃希氏菌属生物学特性 形态与染色 本属细菌为革兰氏阴性两端钝圆、中等大小的无芽孢杆菌，绝大多数周生鞭毛，能运动，周身还有菌毛，不产生荚膜，某些菌株有荚膜。 培养特性 1)需氧及兼性厌氧菌 2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，在15C-45℃范围内均可生长，但最适生长温度为37℃，最适pH为7.2-7.4。 3)在普通琼脂平板上培养24小时，可形成圆形、凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小的菌落．其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大肠杆菌菌落对光(45角折射)观察可见荧光。 4)在肉汤培养基中生长18-24小时变为均匀浑，而后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。 5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌，也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌落 9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色 埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变红。（麦康基琼脂，18小时，37℃） 革兰氏阴性杆菌 革兰氏阳性杆菌 大肠杆菌扫描电镜照片 大肠杆菌透射电镜照片 大肠杆菌革兰氏染色照片 大肠杆菌平板菌落照片 一、埃希氏菌属生物学特性 生化特性 1）可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或迟缓发酵乳糖； 2）不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵结果不一致; 3）本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧。 4）不产生H2S，不液化明胶，不分解尿素; 5）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质试验阳性，V-P试验阴性，不利用枸橼酸盐。后四项生化特性是典型的大肠埃希氏菌，与此不一致的即为非典型大肠埃希氏菌菌。 IMViC试验：如IMViC试验为+、+、-、-，且乳糖发酵，表明被检物已有粪便污染，有发生肠道传染病的危险，这是卫生细菌中常用的检测指标。（I：吲哚形成试验，M：甲基红试验，Vi：V-P试验，C：枸橼酸盐利用试验） I-吲哚（indol）试验 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 吲哚试剂 M-甲基红（methyl red）实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 甲基红 -葡萄糖→丙酮酸 甲基红 + V-VP（Voges-Proskauer）试验 C-枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 利用枸橼酸盐生长 + 不能利用 - 一、埃希氏菌属生物学特性 抵抗力 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，青霉素对它的作用弱, 易产生耐药菌株. 一、埃希氏菌属生物学特性 致病性：（1）致病因素 侵袭力:大肠杆菌具有抗原和菌毛,抗原有抗吞噬作用,有抵抗抗体和补体的