药用菊花中总黄酮提取、分离、检识与鉴定.pptVIP

药用菊花中总黄酮的提取、分离、检识与鉴定 一、来源 二、主要化学成分 三、提取与分离 四、检识和鉴定 五、含量测定 目录 Insert title text here 一、中药菊花来源 菊花为菊科植物菊(Chrysanthemummorif klium Ramat.) 的干燥头状花序, 具有疏风、清热、明目、解毒功效。药典中规定药用菊花主要有滁菊、 毫菊、 贡菊和杭菊4 个品种，安徽是其较主要的道地产区。 二、主要化学成分 （一）挥发油成分 （二）黄酮类化合物 （三）绿原酸 （四）其他：如氨基酸、微量元素等。 总黄酮类成分 香叶木素 木犀草素 芹菜素 金合欢素 槲皮素 芦丁 1. 抗癌抗肿瘤作用 2.抗氧化作用 3.抑菌抗病毒作用 4.抗心脑血管疾病 5.抗氧化抗衰老作用 6.中枢神经作用 黄酮类主要药理作用 总黄酮的提取与分离 提取 分离 热水提取法 醇提取法 超声波提取法 微波提取 溶剂萃取法 柱色谱法 超临界流体色谱法 超临界流体萃取 三、总黄酮的提取与分离 pH梯度萃取法 高效液相色谱法 提取方法 总黄酮提取率% 浸膏得率% 水回流法 6.15 26.96 索氏提取法 4.98 25.63 超声法 6.45 24.78 乙醇回流法 7.34 28.96 不同处理方法总黄酮提取率和浸膏得率 表1 不同处理方法总黄酮提取率和浸膏得率比较（n=3） 乙醇回流法是经典的提取方法，查阅文献得到此法的总黄酮的提取率较高，且操作简单，对仪器要求不高，综合提取率及实验室条件等因素，我组决定采用70%乙醇回流法提取菊花中的总黄酮。 拟提取方法-------乙醇回流法 拟提取方法-------乙醇回流法 菊花 粉末50g 减压回收乙醇，浓缩至50ml，得浸膏。 加8 倍量70%乙醇400ml,浸泡1 h,回流提取2 次, 每次1 h（加适量硼酸）合并滤液 浸膏中加入适量水使混悬 ,依次用适量 石油醚、氯仿萃取 , 氯仿层 黄酮类 成分 浓缩液（即提取的浸膏） 石油醚层 脂溶性成分如叶绿素、胡萝卜素 水层 水溶性杂质如pro、多糖 用旋转蒸发仪减压蒸馏回收溶剂 膏液置烘箱内低温烘干,并称重。 (一)理化检识 1.盐酸-镁粉反应 样品+ 1ml乙醇溶解 + 少许镁粉，振摇 + 几滴浓盐酸 1-2min后，观察现象 2.四氢硼钠还原反应 样品1~2mg+适量甲醇溶解 + NaBH4 10mg +几滴1%HCl 黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇：显红~紫红色 二氢黄酮或二氢黄酮醇：红~紫红色 四、检识与鉴定 3.三氯化铝反应 样品的乙醇溶液 + 1%AlCl3乙醇溶液反应 络合物（黄色） 凡具3-OH、4-C=O；5-OH、 4-C=O；或邻二酚羟基结构的黄酮类均可显色 4.碱性试剂反应（NaOH） 黄酮类显红色 取4支试管,编号1、2、3、4分别加入样品试剂 检识与鉴定 4 2 3 1 4 2 3 1 1%三氧化铝1mL 1ml浓HCl O,1g镁粉 1mlNaOH 1ml四氢硼钠,几滴浓HCl （二）色谱检识（TLC） 材料:硅胶G-CMC-Na板 展开剂: 苯-吡啶-甲酸(36∶9∶5) 对照品:1%芦丁甲醇液 显色剂:1%三氯化铝乙醇液 方法：（1）点样 （2）展开 （3）显色：待展开剂挥散尽后,喷洒1%Alcl3乙醇液,lmin后,出现大量黄 色斑点,紫外光下显黄绿色、测Rf值 检识与鉴定 检识与鉴定 五、总黄酮类成分定量分析 510nm 1.样品溶液制备 样品干浸膏加50ml乙醇全部溶解得样品母液 精密移取Iml 5%亚硝酸溶液1ml,放置6min 10%硝酸铝1ml, 放置6min 10%氢氧化钠试液10ml + ｛ 甲醇定容 摇匀, 放置15 min 摇匀，得芦丁对照液母液 于50mL容量瓶内 加乙醇适量溶解并定容 精密称取干燥至恒重的无水芦丁10mg 0.0ml 1.0ml 2.0ml 3.0ml 4.0ml 5.0ml 6.0ml, 5%亚硝酸钠溶液1ml,放置6min 10%硝酸铝1ml, 放置6min 10%氢氧化钠试液10ml 2.对照品的制备 分置于25ml容量瓶中 ｛ 甲醇定容 摇匀, 放置15 min 3.最大吸收波长的选择 对照品 样品 确定含