甲状腺球蛋白的定量分析.PDFVIP

海外检验医学 年 月第 卷第 期 论著 甲状腺球蛋白的定量分析 应用免疫亲和多肽富集和串联质谱测定一种低丰度血清蛋白 背景 血清肿瘤标志物是临床化学的重要检测指标 它决定癌症患者是否需要进一步治疗 大 量蛋白质组学把研究目标放在确定新的肿瘤标志物上 以便及早发现恶性肿瘤 然而优化已知肿瘤 标志物的定量方法也是改进恶性肿瘤检测的另一途径 目前在临床实验室内源性免疫球蛋白是 免疫分析法的潜在干扰物而且由于使用同一仪器平台交叉污染也可能影响其它免疫分析法 为 了解决上述问题 本研究建立了一种特异 高效的方法 该方法使用免疫亲和多肽富集甲状腺球蛋 白 并用串联质谱定量 方法 甲状腺球蛋白经胰蛋白酶消化后串联质谱鉴定出 种低浓度的多肽产物 用这些多肽 产生多克隆抗体 提取人血清胰蛋白酶消化产物中相应的 种多肽 并用 的多反应监测 模式定量每种多肽外标法定量 结果该方法对人血清中内源性甲状腺球蛋白的检测限为 相当于 与免疫 分析法的测定结果具有较好的相关性 结论 免疫亲和多肽富集和串联质谱可以检测皮克摩尔浓度水平的甲状腺球蛋白的胰蛋白酶 消化多肽 其它内源性免疫球蛋白的胰蛋白酶消化产物可能干扰传统的免疫测定对该方法则没有 干扰 本研究建立了一种免疫亲和色谱分离和串联质谱定量分析的方法该方法可作为常用的分析 策略来定量人血清中肿瘤抗原和其它低丰度蛋白 为了研究疾病的诊断和预后利用蛋白质组学 限制 的方法发现新的生物标志物一直以来广受关注 然 许多研究已经详细阐述了甲状腺球蛋白定量 而 生物标志物的临床有效性成为主要的难题 分析方法中存在的问题 这些问题同样存在于其 尽管生物标志物研究的最终目的是开发新的临床检 它免疫分析方法 例如近 的患者血清中存 测方法然而众所周知目前普遍采用的免疫分析法 在抗体这些抗体会干扰免疫测定 分化 存在许多缺陷 当检测不同的患者人群时这些缺 型甲状腺癌患者体内的自身抗体甚至达到 陷将阻碍新的疾病标志物在临床的成功应用 血清 其原因目前还不完全清楚 另外 甲状腺球蛋白是临床化学领域最有效的肿瘤 的患者有非特异性的异嗜性干扰抗体能结合试 其与影像学检查的联合 已被用来确诊 标志物之一 剂中的免疫球蛋白而干扰测定尤其可以引起夹心 及治疗甲状腺恶性肿瘤 尽管如此分析方法