微载体细胞培养工艺知技术平台的建立.pptVIP

微载体培养技术平台建立 技术管理 吴炳元 研发 产品注册 产品投放市场 产业化 目标 种子构建平台 发酵平台 纯化平台 制剂平台 质检平台 质保注册 项目目标及技术支持 产品目标及技术平台 内容介绍 发酵技术平台的构成要素 发酵培养的优点 建立技术平台的意义 平台构成要素 发酵培养的优点 总体 兼备了悬浮培养和单层培养的优点 表面积 扩大了表面积，提高细胞密度 培养条件 培养条件稳定、传质和传氧较好、培养均一，产品均一，易于线性放大 操作 操作简便，便于采样和监控 放大 易于扩大培养规模、降低生产成本，适合疫苗的工业化、自动化生产 污染风险 封闭的管道系统降低了受污染的风险，同时也减少了人力、物力以及财力 建立技术平台的目的 基础研究 建立工艺 中试生产 放大工艺 工艺优化 完善工艺 工业化生产 工艺成熟 发酵技术平台的构成要素 厂房及试验室 发酵设备及辅助设施（发酵系统） 适宜细胞基质 微载体的类型 适宜的培养方法 培养基及添加剂 培养参数的调控 相关的检测技术 人员素质及技术 标准操作程序 资金投入 平台构建流程 确定项目目标（需求） 可行性分析（商业论证、风险评估） 系统设计（沟通） 制定计划 (创造条件) 方案实施 （控制） 系统验证 （确认） 系统评估验收（标准） 发酵培养工艺 研究内容 工艺放大方式 研究内容 符合药典规定 符合注册标准 建立种子库 建立工艺路线 确定生产规程 建立质量标准 建立质量检验方法 建立标准操作程序 工艺放大方式 工艺路线不同 系统配置不同 技术管理不同 同级放大 逐级放大 工艺技术 反应器操作技术 细胞传代技术 微载体处理技术 细胞消化技术 细胞计数技术 系统维护保养技术 放大培养工艺路线 搅拌瓶 14L 生物反应器 75L生物反应器 病毒培养条件研究 不同的维持液 不同培养温度比较 不同pH比较 不同MOI 比较 不同 病毒接种方法 不同病毒接种时间 不同的收获时间 不同的收获方法 收获液稳定性研究 发酵系统的工艺设计 发酵系统的结构 发酵培养的参数控制 发酵系统的结构 罐体 灭菌系统 通气(汽)系统 补料系统 搅拌系统 温控系统 控制系统 液位控制 收获系统 称重系统 清洁 泵 发酵系统结构 控制系统 供应系统 服务单元 培养系统 （罐体） 排放系统 取样 手动 保温 辅助系统 工业发酵系统 气 气体过滤器 冷凝器 气体过滤器 温控系统 轴封 取样 收获 纯蒸汽 进料 pH O T 电极 灌流管 发酵培养控制参数 温度 PH 溶氧 搅拌 葡萄糖、渗透压 其他辅助参数：液位、罐压、等 ↑: 纯蒸汽、电加热等 ↓: 冷却水 ↑: NaHCO3 ↓: CO2 ↑: 氧气 空气 ↓: 氮气 搅拌速度： 搅拌方式 控制系统 1.温度控制 2.pH控制 3.溶氧控制 4.转速控制 5.压力控制 6.重量控制 7.液面控制 8.培养状态显示 9.参数设置和存储打印信息 细胞质量控制 细胞来源清楚 建库规范 复苏操作正确 细胞消化技术可靠 细胞培养条件标准化 细胞检查技术稳定 参数调整合理 培养基适宜 培养方法设计 培养方法分类 批培养（batch culture） 加量批培养（feeding culture) 罐流培养(perfusion culture) 再循环培养(recirculation culture) 换液培养(semi- continuous cultue) 设计依据 1. 培养目的 2 培养规模 3. 发酵培养量 4. 细胞浓度 5. 病毒培养时间 6. 原材料消耗 7. 操作简便 应用控制 细胞培养的流程 过程控制标准 培养参数调节 细胞繁殖特性 病毒繁殖特性 各种因素的相对平衡 Vero细胞生长曲线 3g/l微载体细胞生长曲线 6g/l微载体细胞生长曲线 BHK-21细胞 第1天 第2天 第3天 第4天 Vero细胞培养倍增数 3g/ml微载体 接种密度 （104cells/cm2） 40 第6天细胞密度 （104cells/cm2） 420 细胞扩增倍数 3.39 6g/ml微载体 接种密度 （104cells/cm2） 60 第6天细胞密度 （104cells/cm2） 750 细胞扩增倍数 3.64 乙脑病毒引起的细胞病变 (+) (++) (++++